中国药科大学学报
中國藥科大學學報
중국약과대학학보
JOURNAL OF CHINA PHARMACEUTICAL UNIVERSITY
2005年
6期
594-598
,共5页
辛中帅%奚涛%罗学刚%林超
辛中帥%奚濤%囉學剛%林超
신중수%해도%라학강%림초
MDR1基因%多药耐药%CHO细胞
MDR1基因%多藥耐藥%CHO細胞
MDR1기인%다약내약%CHO세포
目的:构建人多药耐药基因(MDR1)的真核表达载体,转染CHO细胞,研究MDR1基因在真核细胞中的表达及功能.方法:将MDR1全长基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),利用阳离子脂质体转染CHO细胞,RT-PCR检测MDR1转染阳性细胞,并用G418筛选稳定表达MDR1基因的细胞,通过测定细胞对Rh123的外排作用以及对阿霉素的耐受性确定MDR1基因在正常细胞中的功能.结果:酶切鉴定和测序结果证明构建的重组表达载体pcDNA-MDR1序列正确.RT-PCR分析以及荧光显微镜观察结果表明:该重组表达载体已在CHO细胞中有效转录并稳定表达.Rh123外排和MTT药敏实验结果显示:转染pcDNA-MDR1的CHO细胞对Rh123外排作用显著高于未转染的CHO细胞,并且转染后的CHO细胞对阿霉素的耐药性也有显著提高.结论:成功构建了稳定表达MDR1并具有多药耐药功能的细胞株,有望成为多药耐药性药物研究的细胞模型.
目的:構建人多藥耐藥基因(MDR1)的真覈錶達載體,轉染CHO細胞,研究MDR1基因在真覈細胞中的錶達及功能.方法:將MDR1全長基因剋隆到真覈錶達載體pcDNA3.1(+),利用暘離子脂質體轉染CHO細胞,RT-PCR檢測MDR1轉染暘性細胞,併用G418篩選穩定錶達MDR1基因的細胞,通過測定細胞對Rh123的外排作用以及對阿黴素的耐受性確定MDR1基因在正常細胞中的功能.結果:酶切鑒定和測序結果證明構建的重組錶達載體pcDNA-MDR1序列正確.RT-PCR分析以及熒光顯微鏡觀察結果錶明:該重組錶達載體已在CHO細胞中有效轉錄併穩定錶達.Rh123外排和MTT藥敏實驗結果顯示:轉染pcDNA-MDR1的CHO細胞對Rh123外排作用顯著高于未轉染的CHO細胞,併且轉染後的CHO細胞對阿黴素的耐藥性也有顯著提高.結論:成功構建瞭穩定錶達MDR1併具有多藥耐藥功能的細胞株,有望成為多藥耐藥性藥物研究的細胞模型.
목적:구건인다약내약기인(MDR1)적진핵표체재체,전염CHO세포,연구MDR1기인재진핵세포중적표체급공능.방법:장MDR1전장기인극륭도진핵표체재체pcDNA3.1(+),이용양리자지질체전염CHO세포,RT-PCR검측MDR1전염양성세포,병용G418사선은정표체MDR1기인적세포,통과측정세포대Rh123적외배작용이급대아매소적내수성학정MDR1기인재정상세포중적공능.결과:매절감정화측서결과증명구건적중조표체재체pcDNA-MDR1서렬정학.RT-PCR분석이급형광현미경관찰결과표명:해중조표체재체이재CHO세포중유효전록병은정표체.Rh123외배화MTT약민실험결과현시:전염pcDNA-MDR1적CHO세포대Rh123외배작용현저고우미전염적CHO세포,병차전염후적CHO세포대아매소적내약성야유현저제고.결론:성공구건료은정표체MDR1병구유다약내약공능적세포주,유망성위다약내약성약물연구적세포모형.
