CAJ | 학술논문

目的:探讨含腺病毒基因E1A、融合自杀基因CDglyTK及报告基因GFP的重组腺病毒rAd-E1A-CDglyTK与酶前体药物5-FC和(或)GCV联合应用对人卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用.方法:将重组腺病毒质粒prAd-E1A-CDglyTK经脂质体介导转染293细胞,进行病毒的扩增、纯化与PCR鉴定,以紫外分光光度法与TCID50法测定纯化病毒的颗粒浓度与感染性滴度,计算病毒比活性;在SKOV3细胞中观察重组病毒的复制能力及感染效率,确定感染率达90%以上的最小MOI.用MTT法观察感染重组病毒的SKOV3细胞对5-FC或GCV的敏感性,并计算IC50;观察一定MOI的rAd-E1A-CDglyTK或重组复制缺陷型腺病毒rAd-CDglyTK与IC50的5-FC和(或)GCV联合应用对SKOV3细胞生长的抑制作用.结果:经PCR和琼脂糖凝胶电泳证实,纯化重组腺病毒中存在E1A和CDglyTK两个基因片段,其病毒颗粒浓度和感染性滴度分别为9.47×1011VP/ml和3.16×1010IU/ml,病毒比活性为3.34%.重组病毒可在SKOV3细胞中复制,对SKOV3细胞的感染效率随MOI的增加而增加,可致细胞感染率达90%以上的最小MOI为50 IU/cell.5-FC或GCV明显抑制感染细胞的生长,且存在明显的剂量依赖效应.两种重组腺病毒/前药系统的抑瘤作用比较显示,rAd-E1A-CDglyTK组细胞生长抑制率[(16.57±1.59)%]显著高于rAd-CDglyTK组[(10.44±1.80)%,P<0.01];与IC50的5-FC和GCV双药联合应用,其抑制率达(71.68±2.63)%,显著高于rAd-CDglyTK/5-FC+GCV组的(63.64±2.91)%(P<0.01).结论:重组腺病毒rAd-E1A-CDglyTK与酶前体药物联合应用对卵巢癌SKOV3细胞具有显著的抑制作用,其效果优于重组复制缺陷型腺病毒rAd-CDglyTK.
목적:탐토함선병독기인E1A、융합자살기인CDglyTK급보고기인GFP적중조선병독rAd-E1A-CDglyTK여매전체약물5-FC화(혹)GCV연합응용대인란소암SKOV3세포적억제작용.방법:장중조선병독질립prAd-E1A-CDglyTK경지질체개도전염293세포,진행병독적확증、순화여PCR감정,이자외분광광도법여TCID50법측정순화병독적과립농도여감염성적도,계산병독비활성;재SKOV3세포중관찰중조병독적복제능력급감염효솔,학정감염솔체90%이상적최소MOI.용MTT법관찰감염중조병독적SKOV3세포대5-FC혹GCV적민감성,병계산IC50;관찰일정MOI적rAd-E1A-CDglyTK혹중조복제결함형선병독rAd-CDglyTK여IC50적5-FC화(혹)GCV연합응용대SKOV3세포생장적억제작용.결과:경PCR화경지당응효전영증실,순화중조선병독중존재E1A화CDglyTK량개기인편단,기병독과립농도화감염성적도분별위9.47×1011VP/ml화3.16×1010IU/ml,병독비활성위3.34%.중조병독가재SKOV3세포중복제,대SKOV3세포적감염효솔수MOI적증가이증가,가치세포감염솔체90%이상적최소MOI위50 IU/cell.5-FC혹GCV명현억제감염세포적생장,차존재명현적제량의뢰효응.량충중조선병독/전약계통적억류작용비교현시,rAd-E1A-CDglyTK조세포생장억제솔[(16.57±1.59)%]현저고우rAd-CDglyTK조[(10.44±1.80)%,P<0.01];여IC50적5-FC화GCV쌍약연합응용,기억제솔체(71.68±2.63)%,현저고우rAd-CDglyTK/5-FC+GCV조적(63.64±2.91)%(P<0.01).결론:중조선병독rAd-E1A-CDglyTK여매전체약물연합응용대란소암SKOV3세포구유현저적억제작용,기효과우우중조복제결함형선병독rAd-CDglyTK.