中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2009年
1期
133-136
,共4页
骨髓间充质干细胞%胞嘧啶脱氨酶%基因转染%脂质体
骨髓間充質榦細胞%胞嘧啶脫氨酶%基因轉染%脂質體
골수간충질간세포%포밀정탈안매%기인전염%지질체
背景:自杀基因独有的旁观者效应,可显著提供肿瘤细胞杀伤效果,同时还与放射治疗、免疫摹因治疗联合应用,并克服了基因转导效率低的缺陷.胞嘧啶脱氨酶(cytosine deaminase,CD)即可产生强大的旁观者效应.目的:观察脂质体介导真核表达载体CD基因转染鼠骨髓间充质干细胞的效果及其基因表达.设计、时间及地点:细胞学基因水平实验,于2007-05/12在大连理工大学干细胞与组织工程研发中心完成.材料:SPF级C57BL纯系小鼠6只,由大连医科大学实验动物中心提供.连接产物转化感受态大肠杆菌DH5 α由大连理工大学干细胞与组织工程研发中心提供.LipofectamineTM 2000脂质体为Invitrogen产品.方法:取连接产物转化感受态大肠杆菌DH5 α,提取质粒DNA,对质粒pIRES2-AcGFP1-CD进行Xhol和BamHI双酶切,用于转染.取小鼠双侧下肢股骨和胫骨,贴壁法分离纯化骨髓间充质干细胞,传至第3代制成单细胞恳液,加入荧光标记的CD44,CD45,CD90,CD105抗体后,采用Lipofectamine 2000介导法转染第3代骨髓间充质干细胞.主要观察指标:重组质粒的鉴定,流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞表面标记表达,细胞转染后CD基因的表达.结果:质粒pIRES2-AcGFP1-CD酶切产物经琼脂糖凝胶电泳后,于1.0～1.5 kb处有一条带出现,符合CD基因长度.细胞表面标记CD45呈阴性,CD44,CD90,CD105呈阳性.pIRES2-AcGFP1-CD基因转染36 h后,荧光倒置相差显微镜下可见小鼠骨髓间充质干细胞有绿色荧光蛋白的表达,48 h后细胞仍有荧光表达,且强度明显增强.结论:脂质体介导的CD基因在鼠骨髓间充质干细胞中成功表达,于转染48 h后达峰值.
揹景:自殺基因獨有的徬觀者效應,可顯著提供腫瘤細胞殺傷效果,同時還與放射治療、免疫摹因治療聯閤應用,併剋服瞭基因轉導效率低的缺陷.胞嘧啶脫氨酶(cytosine deaminase,CD)即可產生彊大的徬觀者效應.目的:觀察脂質體介導真覈錶達載體CD基因轉染鼠骨髓間充質榦細胞的效果及其基因錶達.設計、時間及地點:細胞學基因水平實驗,于2007-05/12在大連理工大學榦細胞與組織工程研髮中心完成.材料:SPF級C57BL純繫小鼠6隻,由大連醫科大學實驗動物中心提供.連接產物轉化感受態大腸桿菌DH5 α由大連理工大學榦細胞與組織工程研髮中心提供.LipofectamineTM 2000脂質體為Invitrogen產品.方法:取連接產物轉化感受態大腸桿菌DH5 α,提取質粒DNA,對質粒pIRES2-AcGFP1-CD進行Xhol和BamHI雙酶切,用于轉染.取小鼠雙側下肢股骨和脛骨,貼壁法分離純化骨髓間充質榦細胞,傳至第3代製成單細胞懇液,加入熒光標記的CD44,CD45,CD90,CD105抗體後,採用Lipofectamine 2000介導法轉染第3代骨髓間充質榦細胞.主要觀察指標:重組質粒的鑒定,流式細胞儀檢測骨髓間充質榦細胞錶麵標記錶達,細胞轉染後CD基因的錶達.結果:質粒pIRES2-AcGFP1-CD酶切產物經瓊脂糖凝膠電泳後,于1.0～1.5 kb處有一條帶齣現,符閤CD基因長度.細胞錶麵標記CD45呈陰性,CD44,CD90,CD105呈暘性.pIRES2-AcGFP1-CD基因轉染36 h後,熒光倒置相差顯微鏡下可見小鼠骨髓間充質榦細胞有綠色熒光蛋白的錶達,48 h後細胞仍有熒光錶達,且彊度明顯增彊.結論:脂質體介導的CD基因在鼠骨髓間充質榦細胞中成功錶達,于轉染48 h後達峰值.
배경:자살기인독유적방관자효응,가현저제공종류세포살상효과,동시환여방사치료、면역모인치료연합응용,병극복료기인전도효솔저적결함.포밀정탈안매(cytosine deaminase,CD)즉가산생강대적방관자효응.목적:관찰지질체개도진핵표체재체CD기인전염서골수간충질간세포적효과급기기인표체.설계、시간급지점:세포학기인수평실험,우2007-05/12재대련리공대학간세포여조직공정연발중심완성.재료:SPF급C57BL순계소서6지,유대련의과대학실험동물중심제공.련접산물전화감수태대장간균DH5 α유대련리공대학간세포여조직공정연발중심제공.LipofectamineTM 2000지질체위Invitrogen산품.방법:취련접산물전화감수태대장간균DH5 α,제취질립DNA,대질립pIRES2-AcGFP1-CD진행Xhol화BamHI쌍매절,용우전염.취소서쌍측하지고골화경골,첩벽법분리순화골수간충질간세포,전지제3대제성단세포간액,가입형광표기적CD44,CD45,CD90,CD105항체후,채용Lipofectamine 2000개도법전염제3대골수간충질간세포.주요관찰지표:중조질립적감정,류식세포의검측골수간충질간세포표면표기표체,세포전염후CD기인적표체.결과:질립pIRES2-AcGFP1-CD매절산물경경지당응효전영후,우1.0～1.5 kb처유일조대출현,부합CD기인장도.세포표면표기CD45정음성,CD44,CD90,CD105정양성.pIRES2-AcGFP1-CD기인전염36 h후,형광도치상차현미경하가견소서골수간충질간세포유록색형광단백적표체,48 h후세포잉유형광표체,차강도명현증강.결론:지질체개도적CD기인재서골수간충질간세포중성공표체,우전염48 h후체봉치.
