农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2010年
2期
254-259
,共6页
郭绍辉%杨永柱%王晓雯%谢成建%杨星勇
郭紹輝%楊永柱%王曉雯%謝成建%楊星勇
곽소휘%양영주%왕효문%사성건%양성용
益母草%抗菌蛋白%毕赤酵母%分泌表达
益母草%抗菌蛋白%畢赤酵母%分泌錶達
익모초%항균단백%필적효모%분비표체
LJAMP2是一种分离自益母草(Leonurus japonicus Houtt.)种子的非专一性脂转移蛋白类抗菌蛋白.将编码成熟的LJAMP2蛋白的基冈(GenBank Accession No.AY971513)插入到巴斯德毕赤酵母(Pichia pas-toris)表达载体pPIC9K中;重组质粒pPIC9K-LJAMP2经线性化后,用电转化法导入毕赤酵母菌株GS115(his-/mut+)中.转化子用含1.75 mg/mL G418的YPD平板筛选获得多拷贝Mut+转化子.将1%甲醇诱导LJAMP2表达后的发酵液,经进一步浓缩、凝胶过滤脱盐、CM FF阳离子交换色谱和反相HPLC进行纯化,获得纯度90%以上的LJAMP2菌株诱导24 h即有LJAMP2的表达,诱导168 h表达量达到最高;表达的LJAMP2蛋白对黑曲霉(Aspergillus niger)、玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)、镰刀菌(Fusarium graminearum)真菌表现出抑制活性.
LJAMP2是一種分離自益母草(Leonurus japonicus Houtt.)種子的非專一性脂轉移蛋白類抗菌蛋白.將編碼成熟的LJAMP2蛋白的基岡(GenBank Accession No.AY971513)插入到巴斯德畢赤酵母(Pichia pas-toris)錶達載體pPIC9K中;重組質粒pPIC9K-LJAMP2經線性化後,用電轉化法導入畢赤酵母菌株GS115(his-/mut+)中.轉化子用含1.75 mg/mL G418的YPD平闆篩選穫得多拷貝Mut+轉化子.將1%甲醇誘導LJAMP2錶達後的髮酵液,經進一步濃縮、凝膠過濾脫鹽、CM FF暘離子交換色譜和反相HPLC進行純化,穫得純度90%以上的LJAMP2菌株誘導24 h即有LJAMP2的錶達,誘導168 h錶達量達到最高;錶達的LJAMP2蛋白對黑麯黴(Aspergillus niger)、玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)、鐮刀菌(Fusarium graminearum)真菌錶現齣抑製活性.
LJAMP2시일충분리자익모초(Leonurus japonicus Houtt.)충자적비전일성지전이단백류항균단백.장편마성숙적LJAMP2단백적기강(GenBank Accession No.AY971513)삽입도파사덕필적효모(Pichia pas-toris)표체재체pPIC9K중;중조질립pPIC9K-LJAMP2경선성화후,용전전화법도입필적효모균주GS115(his-/mut+)중.전화자용함1.75 mg/mL G418적YPD평판사선획득다고패Mut+전화자.장1%갑순유도LJAMP2표체후적발효액,경진일보농축、응효과려탈염、CM FF양리자교환색보화반상HPLC진행순화,획득순도90%이상적LJAMP2균주유도24 h즉유LJAMP2적표체,유도168 h표체량체도최고;표체적LJAMP2단백대흑곡매(Aspergillus niger)、옥미소반병균(Bipolaris maydis)、렴도균(Fusarium graminearum)진균표현출억제활성.
