黑曲霉木聚糖酶基因xynA的克隆及真核表达载体的构建
흑곡매목취당매기인xynA적극륭급진핵표체재체적구건
Cloning of Xylanase Gene xynA from Aspergillus niger and Construction of Eukaryotic Expression Vector
  • 万方数据
    华中农业大学学报 화중농업대학학보
    JOURNAL OF HUAZHONG AGRICULTURAL UNIVERSITY
    2010年 5期 588-592 ,共5页

    张茂%刘德武%林纯%贺晓燕%孟繁明%周庆丰%杜云平%吴珍芳

    장무%류덕무%림순%하효연%맹번명%주경봉%두운평%오진방

    黑曲霉%木聚糖酶%xynA基因%真核表达 黑麯黴%木聚糖酶%xynA基因%真覈錶達
    흑곡매%목취당매%xynA기인%진핵표체
    从黑曲霉(Aspergillus niger)GIM3.452中克隆得到木聚糖酶基因xynA的成熟肽编码序列.通过重叠延伸PCR将不带原基因信号肽编码序列的xynA基因片段和猪腮腺分泌蛋白(parotid secretory protein,PSP)基因的信号肽进行拼接得到融合片段SPA,并将其克隆到真核表达载体pcDNA6/HisTM A中,得到重组质粒pcDNA-SPA,重组质粒经过酶切、测序鉴定其读码框的正确性,在脂质体介导下将重组质粒pcDNA-SPA转染猪肾细胞(PK15),通过RT-PCR证实其在PK15细胞中表达,并在细胞培养液中检测到木聚糖酶活性为7.6 IU/mL.
    종흑곡매(Aspergillus niger)GIM3.452중극륭득도목취당매기인xynA적성숙태편마서렬.통과중첩연신PCR장불대원기인신호태편마서렬적xynA기인편단화저시선분비단백(parotid secretory protein,PSP)기인적신호태진행병접득도융합편단SPA,병장기극륭도진핵표체재체pcDNA6/HisTM A중,득도중조질립pcDNA-SPA,중조질립경과매절、측서감정기독마광적정학성,재지질체개도하장중조질립pcDNA-SPA전염저신세포(PK15),통과RT-PCR증실기재PK15세포중표체,병재세포배양액중검측도목취당매활성위7.6 IU/mL.
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