CAJ | 학술논문

目的:原核表达猴B病毒糖蛋白gC胞外区片段,评价其在猴B病毒血清学检测中的特异性和敏感性,为猴B病毒检测奠定基础.方法:利用PCR方法扩增gC胞外区基因片段,同时合成该片段的优化密码子序列,将其插入表达载体pET-28b(+)形成重组质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)并进行诱导表达;纯化蛋白先以Western印迹进行验证,再以ELISA方法和标准阳性、阴性血清评价其诊断价值.结果:直接从病毒DNA模板上获得的基因片段未能表达,而优化后的基因片段表达水平较高,表达蛋白的相对分子质量约为48×10~3,为包涵体形式,占菌体总蛋白的30%左右;Western印迹显示,重组蛋白能与猴B病毒阳性血清和His单克隆抗体发生免疫反应;34份标准阳性血清和25份阴性血清的ELISA检测结果显示,重组蛋白的敏感性和特异性分别为94.1%(32/34)和100%(25/25).结论:利用原核表达系统制备的gC胞外区重组蛋白,可作为猴B病毒血清学检测抗原,其特异性和敏感性都较好.
목적:원핵표체후B병독당단백gC포외구편단,평개기재후B병독혈청학검측중적특이성화민감성,위후B병독검측전정기출.방법:이용PCR방법확증gC포외구기인편단,동시합성해편단적우화밀마자서렬,장기삽입표체재체pET-28b(+)형성중조질립,전화지대장간균BL21(DE3)병진행유도표체;순화단백선이Western인적진행험증,재이ELISA방법화표준양성、음성혈청평개기진단개치.결과:직접종병독DNA모판상획득적기인편단미능표체,이우화후적기인편단표체수평교고,표체단백적상대분자질량약위48×10~3,위포함체형식,점균체총단백적30%좌우;Western인적현시,중조단백능여후B병독양성혈청화His단극륭항체발생면역반응;34빈표준양성혈청화25빈음성혈청적ELISA검측결과현시,중조단백적민감성화특이성분별위94.1%(32/34)화100%(25/25).결론:이용원핵표체계통제비적gC포외구중조단백,가작위후B병독혈청학검측항원,기특이성화민감성도교호.