湖南农业大学学报（自然科学版）
湖南農業大學學報（自然科學版）
호남농업대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF HUNAN AGRICULTURAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCES)
2011年
5期
521-525
,共5页
张云%王亚宾%陈丽颖%张红英%侯贝贝%崔保安%胡慧
張雲%王亞賓%陳麗穎%張紅英%侯貝貝%崔保安%鬍慧
장운%왕아빈%진려영%장홍영%후패패%최보안%호혜
猪传染性胃肠炎病毒%S基因%实时荧光定量RT-PCR技术
豬傳染性胃腸炎病毒%S基因%實時熒光定量RT-PCR技術
저전염성위장염병독%S기인%실시형광정량RT-PCR기술
为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank收录的TGEV-Miller毒株的S基因序列,设计合成1对特异性引物,用RT-PCR方法从疫苗株中扩增TGEV S基因的部分保守片段,并克隆到pGEM-T Easy载体上,得到重组质粒作为荧光定量RT-PCR检测的标准模板,进行SYBRGreen I荧光定量RT-PCR扩增,并制作标准曲线,建立TGEV的荧光定量RT-PCR检测方法.结果表明:该方法检测灵敏度可达30拷贝/μL,与猪圆环病毒、猪乙型脑炎病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒和猪流感病毒和猪细小病毒不发生交叉反应,具有重复性好、特异性强、灵敏度高等优点,可用于临床TGEV感染的早期诊断以及分子流行病学调查.
為建立豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)SYBR Green Ⅰ熒光定量RT-PCR檢測方法,根據GenBank收錄的TGEV-Miller毒株的S基因序列,設計閤成1對特異性引物,用RT-PCR方法從疫苗株中擴增TGEV S基因的部分保守片段,併剋隆到pGEM-T Easy載體上,得到重組質粒作為熒光定量RT-PCR檢測的標準模闆,進行SYBRGreen I熒光定量RT-PCR擴增,併製作標準麯線,建立TGEV的熒光定量RT-PCR檢測方法.結果錶明:該方法檢測靈敏度可達30拷貝/μL,與豬圓環病毒、豬乙型腦炎病毒、豬偽狂犬病毒、豬瘟病毒和豬流感病毒和豬細小病毒不髮生交扠反應,具有重複性好、特異性彊、靈敏度高等優點,可用于臨床TGEV感染的早期診斷以及分子流行病學調查.
위건립저전염성위장염병독(TGEV)SYBR Green Ⅰ형광정량RT-PCR검측방법,근거GenBank수록적TGEV-Miller독주적S기인서렬,설계합성1대특이성인물,용RT-PCR방법종역묘주중확증TGEV S기인적부분보수편단,병극륭도pGEM-T Easy재체상,득도중조질립작위형광정량RT-PCR검측적표준모판,진행SYBRGreen I형광정량RT-PCR확증,병제작표준곡선,건립TGEV적형광정량RT-PCR검측방법.결과표명:해방법검측령민도가체30고패/μL,여저원배병독、저을형뇌염병독、저위광견병독、저온병독화저류감병독화저세소병독불발생교차반응,구유중복성호、특이성강、령민도고등우점,가용우림상TGEV감염적조기진단이급분자류행병학조사.
