CAJ | 학술논문

通过不同的分离方法和培养条件探索鲫鱼肝细胞的原代培养,以建立稳定的鲫鱼肝细胞原代培养模型.用台盼蓝染色检测细胞存活率；用WST-1检测细胞活力,同时观察长期培养过程中肝细胞的形态变化.结果显示:组织块培养4～5 d后肝细胞从组织块中迁出并增殖,但这种方法所需时间长且细胞不易收集；机械分散法收集的细胞少,细胞存活率低；而胰蛋白酶消化法获得良好稳定的分离和培养效果.用0.1％胰蛋白酶消化30 min,每克肝重可收集1.47×108个细胞,平均存活率为91.43％.培养基和血清浓度均会影响肝细胞的贴壁和生长.在含有10％(V/V)胎牛血清(FCS)M199培养基中,4％ CO2、28℃,肝细胞培养8～9 d后传代.
통과불동적분리방법화배양조건탐색즉어간세포적원대배양,이건립은정적즉어간세포원대배양모형.용태반람염색검측세포존활솔；용WST-1검측세포활력,동시관찰장기배양과정중간세포적형태변화.결과현시:조직괴배양4～5 d후간세포종조직괴중천출병증식,단저충방법소수시간장차세포불역수집；궤계분산법수집적세포소,세포존활솔저；이이단백매소화법획득량호은정적분리화배양효과.용0.1％이단백매소화30 min,매극간중가수집1.47×108개세포,평균존활솔위91.43％.배양기화혈청농도균회영향간세포적첩벽화생장.재함유10％(V/V)태우혈청(FCS)M199배양기중,4％ CO2、28℃,간세포배양8～9 d후전대.