畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2004年
2期
208-212
,共5页
严琳%陈焕春%覃雅丽%何启盖%肖少波
嚴琳%陳煥春%覃雅麗%何啟蓋%肖少波
엄림%진환춘%담아려%하계개%초소파
猪白细胞介素-2%甲醇酵母%Pichia pastoris%酵母表达
豬白細胞介素-2%甲醇酵母%Pichia pastoris%酵母錶達
저백세포개소-2%갑순효모%Pichia pastoris%효모표체
将猪白细胞介素-2(pIL-2)的完整cDNA序列克隆到甲醇酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC3.5K中,在E.coli体系中鉴定得到阳性克隆子pPIC3.5K-IL2.将pPIC3.5K-IL2经SacI线性化后,转化入经LiC1致敏的P.Pastoris GS115菌株中,得到的重组菌株经1%浓度甲醇诱导后,利用SDS-PAGE电泳,斑点杂交及去糖基化酶消化证实,在培养上清中获得了分泌型表达的猪白细胞介素-2(蛋白分子量约为20 KD),其表达量可达到80 mg/L.用CTLL-2细胞进行活性检测,生物学活性可达2×106 IU/ml.对其表达情况进行时间梯度分析,确定第5天表达量达到最高点,为最佳诱导时间;分析连续4个批次的重组菌株表达情况,结果表明重组菌株在适当菌体浓度下连续培养均能稳定、高效的表达外源蛋白pIL-2.本实验为进一步大规模生产pIL-2提供了理论依据.
將豬白細胞介素-2(pIL-2)的完整cDNA序列剋隆到甲醇酵母(Pichia pastoris)錶達載體pPIC3.5K中,在E.coli體繫中鑒定得到暘性剋隆子pPIC3.5K-IL2.將pPIC3.5K-IL2經SacI線性化後,轉化入經LiC1緻敏的P.Pastoris GS115菌株中,得到的重組菌株經1%濃度甲醇誘導後,利用SDS-PAGE電泳,斑點雜交及去糖基化酶消化證實,在培養上清中穫得瞭分泌型錶達的豬白細胞介素-2(蛋白分子量約為20 KD),其錶達量可達到80 mg/L.用CTLL-2細胞進行活性檢測,生物學活性可達2×106 IU/ml.對其錶達情況進行時間梯度分析,確定第5天錶達量達到最高點,為最佳誘導時間;分析連續4箇批次的重組菌株錶達情況,結果錶明重組菌株在適噹菌體濃度下連續培養均能穩定、高效的錶達外源蛋白pIL-2.本實驗為進一步大規模生產pIL-2提供瞭理論依據.
장저백세포개소-2(pIL-2)적완정cDNA서렬극륭도갑순효모(Pichia pastoris)표체재체pPIC3.5K중,재E.coli체계중감정득도양성극륭자pPIC3.5K-IL2.장pPIC3.5K-IL2경SacI선성화후,전화입경LiC1치민적P.Pastoris GS115균주중,득도적중조균주경1%농도갑순유도후,이용SDS-PAGE전영,반점잡교급거당기화매소화증실,재배양상청중획득료분비형표체적저백세포개소-2(단백분자량약위20 KD),기표체량가체도80 mg/L.용CTLL-2세포진행활성검측,생물학활성가체2×106 IU/ml.대기표체정황진행시간제도분석,학정제5천표체량체도최고점,위최가유도시간;분석련속4개비차적중조균주표체정황,결과표명중조균주재괄당균체농도하련속배양균능은정、고효적표체외원단백pIL-2.본실험위진일보대규모생산pIL-2제공료이론의거.
