药学学报
藥學學報
약학학보
ACTA PHARMACEUTICA SINICA
2006年
5期
406-411
,共6页
薛乔%应跃斌%潘映秋%李丹曦%孙红颖%陈枢青
薛喬%應躍斌%潘映鞦%李丹晞%孫紅穎%陳樞青
설교%응약빈%반영추%리단희%손홍영%진추청
GST-SEC2%超抗原%融合表达%大肠杆菌%MTT法
GST-SEC2%超抗原%融閤錶達%大腸桿菌%MTT法
GST-SEC2%초항원%융합표체%대장간균%MTT법
目的克隆金葡菌肠毒素C2全长基因,构建SEC2的表达载体,实现其可溶性表达,并对纯化的rSEC2蛋白的生物学活性进行研究.方法通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)从金葡菌FRIl230菌株基因中得到肠毒素SEC2的基因,将其克隆至融合表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌进行表达并对融合蛋白进行亲和色谱纯化.通过考察重组SEC2对淋巴细胞的增殖作用及其对肿瘤细胞杀伤活性的影响,对其超抗原活性和免疫学活性进行研究.结果得到正确的肠毒素SEC2基因序列并得到高效表达的融合蛋白,MTT法结果表明,重组SEC2表现出良好的促淋巴细胞增殖活性,且能够增强淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性.结论本研究成功克隆了SEC2基因,表达并纯化出具有抗肿瘤生物学活性的重组SEC2蛋白,为进一步对其分子抗肿瘤作用机制进行研究以及构建靶向抗肿瘤融合蛋白奠定了基础.
目的剋隆金葡菌腸毒素C2全長基因,構建SEC2的錶達載體,實現其可溶性錶達,併對純化的rSEC2蛋白的生物學活性進行研究.方法通過聚閤酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)從金葡菌FRIl230菌株基因中得到腸毒素SEC2的基因,將其剋隆至融閤錶達載體pGEX-4T-1,轉化大腸桿菌進行錶達併對融閤蛋白進行親和色譜純化.通過攷察重組SEC2對淋巴細胞的增殖作用及其對腫瘤細胞殺傷活性的影響,對其超抗原活性和免疫學活性進行研究.結果得到正確的腸毒素SEC2基因序列併得到高效錶達的融閤蛋白,MTT法結果錶明,重組SEC2錶現齣良好的促淋巴細胞增殖活性,且能夠增彊淋巴細胞對腫瘤細胞的殺傷活性.結論本研究成功剋隆瞭SEC2基因,錶達併純化齣具有抗腫瘤生物學活性的重組SEC2蛋白,為進一步對其分子抗腫瘤作用機製進行研究以及構建靶嚮抗腫瘤融閤蛋白奠定瞭基礎.
목적극륭금포균장독소C2전장기인,구건SEC2적표체재체,실현기가용성표체,병대순화적rSEC2단백적생물학활성진행연구.방법통과취합매련식반응(polymerase chain reaction,PCR)종금포균FRIl230균주기인중득도장독소SEC2적기인,장기극륭지융합표체재체pGEX-4T-1,전화대장간균진행표체병대융합단백진행친화색보순화.통과고찰중조SEC2대림파세포적증식작용급기대종류세포살상활성적영향,대기초항원활성화면역학활성진행연구.결과득도정학적장독소SEC2기인서렬병득도고효표체적융합단백,MTT법결과표명,중조SEC2표현출량호적촉림파세포증식활성,차능구증강림파세포대종류세포적살상활성.결론본연구성공극륭료SEC2기인,표체병순화출구유항종류생물학활성적중조SEC2단백,위진일보대기분자항종류작용궤제진행연구이급구건파향항종류융합단백전정료기출.
