CAJ | 학술논문

目的:观察人冠状动脉平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶3与炎症因子白细胞介素1β的关系.方法:实验于2005-05/2006-08在解放军第三○五医院老年病中心实验室完成.人冠状动脉平滑肌实验用5～7代的细胞,按2.5×108 L-1密度接种于25 cm2的培养瓶中,24 h后换液,生长接近80%融合时进行如下处理:①20μg/L质量浓度白细胞介素1β培养0,2,4,8,24,36 h后收集上清夜和细胞.②不同质量浓度(0,5,20,40 μg/L)白细胞介素1β处理6 h后收集上清液和细胞.采用细胞总RNA TR lZol试剂提取RNA,在紫外分光光度计确定总RNA的浓度和纯度,并在12 g/L的琼脂糖凝胶中电泳,凝胶成像分析RNA的质量.应用实时荧光定量聚合酶链反应的方法检测细胞内基质金属蛋白酶3基因的表达量.结果:①细胞总RNA质量及纯度:每份样品取4μL稀释至400μL测定其A260nm/A280nm吸光度比值均在1.8～2.0之间,说明所提RNA纯度较高;电泳图片上可见RNA清晰的18 S和28 S的条带,无弥散,说明RNA质量较好.②目的基因的表达量:同剂量白细胞介素1β作用下,基质金属蛋白酶3基因的表达量在2 h时开始发生上调,8 h达高峰,而后开始下降;在不同剂量白细胞介素1β作用下,基质金属蛋白酶3基因的表达量在实验剂量范围内随着白细胞介素1β的剂量加大呈上升趋势(r=0.904,P=0.000),20μg/L和40μg/L白细胞介素1β作用下,基质金属蛋白酶3基因的表达量差异无显著性(P=0.154),其余各剂量间基质金属蛋白酶3基因的表达量差异均有显著性(P＜0.05).结论:炎症因子白细胞介素1β能促进冠状动脉平滑肌细胞中斑块稳定相关标记物基质金属蛋白酶3的表达,可能是炎症在急性冠状动脉综合征发生发展中的作用机制之一.
목적:관찰인관상동맥평활기세포표체기질금속단백매3여염증인자백세포개소1β적관계.방법:실험우2005-05/2006-08재해방군제삼○오의원노년병중심실험실완성.인관상동맥평활기실험용5～7대적세포,안2.5×108 L-1밀도접충우25 cm2적배양병중,24 h후환액,생장접근80%융합시진행여하처리:①20μg/L질량농도백세포개소1β배양0,2,4,8,24,36 h후수집상청야화세포.②불동질량농도(0,5,20,40 μg/L)백세포개소1β처리6 h후수집상청액화세포.채용세포총RNA TR lZol시제제취RNA,재자외분광광도계학정총RNA적농도화순도,병재12 g/L적경지당응효중전영,응효성상분석RNA적질량.응용실시형광정량취합매련반응적방법검측세포내기질금속단백매3기인적표체량.결과:①세포총RNA질량급순도:매빈양품취4μL희석지400μL측정기A260nm/A280nm흡광도비치균재1.8～2.0지간,설명소제RNA순도교고;전영도편상가견RNA청석적18 S화28 S적조대,무미산,설명RNA질량교호.②목적기인적표체량:동제량백세포개소1β작용하,기질금속단백매3기인적표체량재2 h시개시발생상조,8 h체고봉,이후개시하강;재불동제량백세포개소1β작용하,기질금속단백매3기인적표체량재실험제량범위내수착백세포개소1β적제량가대정상승추세(r=0.904,P=0.000),20μg/L화40μg/L백세포개소1β작용하,기질금속단백매3기인적표체량차이무현저성(P=0.154),기여각제량간기질금속단백매3기인적표체량차이균유현저성(P＜0.05).결론:염증인자백세포개소1β능촉진관상동맥평활기세포중반괴은정상관표기물기질금속단백매3적표체,가능시염증재급성관상동맥종합정발생발전중적작용궤제지일.