中南大学学报（医学版）
中南大學學報（醫學版）
중남대학학보（의학판）
JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCES)
2008年
2期
138-145
,共8页
何晋%谢秀梅%姜德建%方叶青%陈晓彬
何晉%謝秀梅%薑德建%方葉青%陳曉彬
하진%사수매%강덕건%방협청%진효빈
脐带血%内皮祖细胞%分化%非对称性二甲基精氨酸%增殖
臍帶血%內皮祖細胞%分化%非對稱性二甲基精氨痠%增殖
제대혈%내피조세포%분화%비대칭성이갑기정안산%증식
目的:研究人脐带血中两种类型内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)的体外分化特征及非对称性二甲基精氨酸(ADMA)对其增殖的影响.方法:采用6%羟乙基淀粉沉降法和密度梯度离心法联合分离脐带血中单个核细胞,在含有血管内皮生长因子和碱性纤维细胞生长因子的培养基中培养.通过形态学、免疫荧光、逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)和流式细胞分析细胞的生长特点和生物学特征.在贴壁细胞中加入不同浓度的ADMA(1,5和10 μmol/L)作用不同时间(24,48和72 h),用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和细胞克隆计数的方法评价ADMA对EPC增殖的影响.结果:贴壁细胞分为早期内皮祖细胞和晚期内皮祖细胞两种类型细胞.早期内皮祖细胞的形态从小的圆形细胞变成以集落为中心,周围呈发芽式向外生长的细胞群,晚期内皮祖细胞形成典型的"铺路石样".DiL标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-acLDL)和FITC标记荆豆凝集素I(FITC-UEA-I)双染色阳性细胞初步鉴定为内皮祖细胞.RT-PCR提示随着培养时间延长,内皮特异性基因表达变化逐渐增强,流式细胞分析提示早期EPC有AC133,CD34和KDR表达;晚期EPC AC133不表达,CD34表达弱,KDR表达增强.MTY法提示早期EPC增殖能力弱,而晚期EPC增殖能力强;同时ADMA呈量效和时效减少EPC的数目和抑制它的增殖能力.结论:在人的脐带血中获得两种类型EPC,加入ADMA能抑制EPC的增殖,这为进一步研究ADMA对EPC的作用提供了实验基础.
目的:研究人臍帶血中兩種類型內皮祖細胞(endothelial progenitor cells,EPC)的體外分化特徵及非對稱性二甲基精氨痠(ADMA)對其增殖的影響.方法:採用6%羥乙基澱粉沉降法和密度梯度離心法聯閤分離臍帶血中單箇覈細胞,在含有血管內皮生長因子和堿性纖維細胞生長因子的培養基中培養.通過形態學、免疫熒光、逆轉錄多聚酶鏈式反應(RT-PCR)和流式細胞分析細胞的生長特點和生物學特徵.在貼壁細胞中加入不同濃度的ADMA(1,5和10 μmol/L)作用不同時間(24,48和72 h),用四甲基偶氮唑藍(MTT)比色法和細胞剋隆計數的方法評價ADMA對EPC增殖的影響.結果:貼壁細胞分為早期內皮祖細胞和晚期內皮祖細胞兩種類型細胞.早期內皮祖細胞的形態從小的圓形細胞變成以集落為中心,週圍呈髮芽式嚮外生長的細胞群,晚期內皮祖細胞形成典型的"鋪路石樣".DiL標記的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-acLDL)和FITC標記荊豆凝集素I(FITC-UEA-I)雙染色暘性細胞初步鑒定為內皮祖細胞.RT-PCR提示隨著培養時間延長,內皮特異性基因錶達變化逐漸增彊,流式細胞分析提示早期EPC有AC133,CD34和KDR錶達;晚期EPC AC133不錶達,CD34錶達弱,KDR錶達增彊.MTY法提示早期EPC增殖能力弱,而晚期EPC增殖能力彊;同時ADMA呈量效和時效減少EPC的數目和抑製它的增殖能力.結論:在人的臍帶血中穫得兩種類型EPC,加入ADMA能抑製EPC的增殖,這為進一步研究ADMA對EPC的作用提供瞭實驗基礎.
목적:연구인제대혈중량충류형내피조세포(endothelial progenitor cells,EPC)적체외분화특정급비대칭성이갑기정안산(ADMA)대기증식적영향.방법:채용6%간을기정분침강법화밀도제도리심법연합분리제대혈중단개핵세포,재함유혈관내피생장인자화감성섬유세포생장인자적배양기중배양.통과형태학、면역형광、역전록다취매련식반응(RT-PCR)화류식세포분석세포적생장특점화생물학특정.재첩벽세포중가입불동농도적ADMA(1,5화10 μmol/L)작용불동시간(24,48화72 h),용사갑기우담서람(MTT)비색법화세포극륭계수적방법평개ADMA대EPC증식적영향.결과:첩벽세포분위조기내피조세포화만기내피조세포량충류형세포.조기내피조세포적형태종소적원형세포변성이집락위중심,주위정발아식향외생장적세포군,만기내피조세포형성전형적"포로석양".DiL표기적을선화저밀도지단백(Dil-acLDL)화FITC표기형두응집소I(FITC-UEA-I)쌍염색양성세포초보감정위내피조세포.RT-PCR제시수착배양시간연장,내피특이성기인표체변화축점증강,류식세포분석제시조기EPC유AC133,CD34화KDR표체;만기EPC AC133불표체,CD34표체약,KDR표체증강.MTY법제시조기EPC증식능력약,이만기EPC증식능력강;동시ADMA정량효화시효감소EPC적수목화억제타적증식능력.결론:재인적제대혈중획득량충류형EPC,가입ADMA능억제EPC적증식,저위진일보연구ADMA대EPC적작용제공료실험기출.
