农业工程学报
農業工程學報
농업공정학보
2008年
3期
282-285
,共4页
细菌型豆豉%溶栓酶%提取纯化
細菌型豆豉%溶栓酶%提取純化
세균형두시%용전매%제취순화
为深入开发利用中国传统发酵细菌型豆豉溶栓酶,对豆豉溶栓酶分离纯化工艺进行了研究探讨,确认了最佳的纯化条件:首先用饱和度75%的硫酸铵沉淀豆豉溶栓酶;然后利用DEAE-Sepharose FF (Diethylaminoethyl Sepharose Fast Flow,二乙基氨基琼脂糖快速凝胶)阴离子交换柱进行层析,优化的层析条件为用10 mmol/L Tris(Trishydroxymethylaminomen,三羟甲基氨基甲烷)-HCI (pH 8.7)作为上样缓冲液,采用线性梯度洗脱,洗脱液为10mmol/L Tris-HCI(pH 8.7)和0.6mol/LNaCl,洗脱流速为1 mL/min;最后经过Sephadex G-75(葡聚糖凝胶G-75)凝胶过滤,得到纯化倍数为11.29倍的豆豉溶栓酶.利用SDS-PAGE (Sodium dodecyl sulphate-polylamide gel electroresis,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳) 显示经纯化后的酶无杂蛋白,初步鉴定其分子量接近31 ku.
為深入開髮利用中國傳統髮酵細菌型豆豉溶栓酶,對豆豉溶栓酶分離純化工藝進行瞭研究探討,確認瞭最佳的純化條件:首先用飽和度75%的硫痠銨沉澱豆豉溶栓酶;然後利用DEAE-Sepharose FF (Diethylaminoethyl Sepharose Fast Flow,二乙基氨基瓊脂糖快速凝膠)陰離子交換柱進行層析,優化的層析條件為用10 mmol/L Tris(Trishydroxymethylaminomen,三羥甲基氨基甲烷)-HCI (pH 8.7)作為上樣緩遲液,採用線性梯度洗脫,洗脫液為10mmol/L Tris-HCI(pH 8.7)和0.6mol/LNaCl,洗脫流速為1 mL/min;最後經過Sephadex G-75(葡聚糖凝膠G-75)凝膠過濾,得到純化倍數為11.29倍的豆豉溶栓酶.利用SDS-PAGE (Sodium dodecyl sulphate-polylamide gel electroresis,十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳) 顯示經純化後的酶無雜蛋白,初步鑒定其分子量接近31 ku.
위심입개발이용중국전통발효세균형두시용전매,대두시용전매분리순화공예진행료연구탐토,학인료최가적순화조건:수선용포화도75%적류산안침정두시용전매;연후이용DEAE-Sepharose FF (Diethylaminoethyl Sepharose Fast Flow,이을기안기경지당쾌속응효)음리자교환주진행층석,우화적층석조건위용10 mmol/L Tris(Trishydroxymethylaminomen,삼간갑기안기갑완)-HCI (pH 8.7)작위상양완충액,채용선성제도세탈,세탈액위10mmol/L Tris-HCI(pH 8.7)화0.6mol/LNaCl,세탈류속위1 mL/min;최후경과Sephadex G-75(포취당응효G-75)응효과려,득도순화배수위11.29배적두시용전매.이용SDS-PAGE (Sodium dodecyl sulphate-polylamide gel electroresis,십이완기류산납-취병희선알응효전영) 현시경순화후적매무잡단백,초보감정기분자량접근31 ku.
