中国家禽
中國傢禽
중국가금
CHINA POULTRY
2008年
7期
25-28
,共4页
乌骨鸡%Ghrelin基因%原核表达
烏骨鷄%Ghrelin基因%原覈錶達
오골계%Ghrelin기인%원핵표체
采用特异性引物自贵州黑羽乌骨鸡胃部组织克隆了Ghrelin的基因,基因全长2330bp,含有4个外显子,3个内含子.采用RT-PCR技术,获得了Ghrelin cDNA片段(563 bp),序列分析推测,通过可变剪切可产生两段mKNA,cDNA编码区与基因组中的编码区完全一致.黑羽乌骨鸡Ghrelin基因与已知鸡种比较有13～18个碱基不同,相似性为99.1%～99.3%,但其氨基酸序列完全一样,表明禽类的Ghrelin多肽高度保守.将其中Ghrelin编码区亚克隆到原核表达载体pTYB11中,经序列测定碱基序列正确,获得重组质粒pTYB11/G.在IPTG的诱导下,重组质粒在大肠杆菌ER2566中获得表达.当OD600=0.5,IPTG为浓度1 mmol/L,诱导5小时的表达量最高,融合蛋白占细胞总蛋白的40%.采用几丁质结合的预装柱对表达产物进行纯化,产率约为5 mg/L培养液.
採用特異性引物自貴州黑羽烏骨鷄胃部組織剋隆瞭Ghrelin的基因,基因全長2330bp,含有4箇外顯子,3箇內含子.採用RT-PCR技術,穫得瞭Ghrelin cDNA片段(563 bp),序列分析推測,通過可變剪切可產生兩段mKNA,cDNA編碼區與基因組中的編碼區完全一緻.黑羽烏骨鷄Ghrelin基因與已知鷄種比較有13～18箇堿基不同,相似性為99.1%～99.3%,但其氨基痠序列完全一樣,錶明禽類的Ghrelin多肽高度保守.將其中Ghrelin編碼區亞剋隆到原覈錶達載體pTYB11中,經序列測定堿基序列正確,穫得重組質粒pTYB11/G.在IPTG的誘導下,重組質粒在大腸桿菌ER2566中穫得錶達.噹OD600=0.5,IPTG為濃度1 mmol/L,誘導5小時的錶達量最高,融閤蛋白佔細胞總蛋白的40%.採用幾丁質結閤的預裝柱對錶達產物進行純化,產率約為5 mg/L培養液.
채용특이성인물자귀주흑우오골계위부조직극륭료Ghrelin적기인,기인전장2330bp,함유4개외현자,3개내함자.채용RT-PCR기술,획득료Ghrelin cDNA편단(563 bp),서렬분석추측,통과가변전절가산생량단mKNA,cDNA편마구여기인조중적편마구완전일치.흑우오골계Ghrelin기인여이지계충비교유13～18개감기불동,상사성위99.1%～99.3%,단기안기산서렬완전일양,표명금류적Ghrelin다태고도보수.장기중Ghrelin편마구아극륭도원핵표체재체pTYB11중,경서렬측정감기서렬정학,획득중조질립pTYB11/G.재IPTG적유도하,중조질립재대장간균ER2566중획득표체.당OD600=0.5,IPTG위농도1 mmol/L,유도5소시적표체량최고,융합단백점세포총단백적40%.채용궤정질결합적예장주대표체산물진행순화,산솔약위5 mg/L배양액.
