医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2008年
4期
292-295
,共4页
李晓华%郑升%刘优萍%骆天红%罗敏
李曉華%鄭升%劉優萍%駱天紅%囉敏
리효화%정승%류우평%락천홍%라민
蛋白My027%原核表达%生物活性
蛋白My027%原覈錶達%生物活性
단백My027%원핵표체%생물활성
目的 通过原核表达获得大量脂肪新蛋白质My027,并在体外初步研究其生物活性.方法 RT-PCR法扩增出My027片段,插入原核表达载体pGEx-4T-2,构建质粒pGEX-My027.转化BL-21菌,IPTG低温诱导表达融合蛋白,经亲和层析法获得融合蛋白,利用SDS-PAGE、Western印迹及质谱进行搭定.在还原性谷胱甘肽存在的条件下,将纯化得到的融合蛋白作用于乙二醛酶Ⅰ的底物甲基乙二醛,通过分光光度法榆测产物物乳酸谷胱甘肽的生成.结果 仓融合蛋白以水溶形式分泌于大肠埃希菌BL-21胞浆中,纯化后的目的蛋白 SDS-PAGE、Western印迹及质谱证实高效表达,氨基酸序列正确.结论 表人脂肪细胞新蛋白质My027在pGEX-4T-2原核表达载体中可获高效表达,所纯化蛋白具有类似于乙二醛酶Ⅰ的作用.
目的 通過原覈錶達穫得大量脂肪新蛋白質My027,併在體外初步研究其生物活性.方法 RT-PCR法擴增齣My027片段,插入原覈錶達載體pGEx-4T-2,構建質粒pGEX-My027.轉化BL-21菌,IPTG低溫誘導錶達融閤蛋白,經親和層析法穫得融閤蛋白,利用SDS-PAGE、Western印跡及質譜進行搭定.在還原性穀胱甘肽存在的條件下,將純化得到的融閤蛋白作用于乙二醛酶Ⅰ的底物甲基乙二醛,通過分光光度法榆測產物物乳痠穀胱甘肽的生成.結果 倉融閤蛋白以水溶形式分泌于大腸埃希菌BL-21胞漿中,純化後的目的蛋白 SDS-PAGE、Western印跡及質譜證實高效錶達,氨基痠序列正確.結論 錶人脂肪細胞新蛋白質My027在pGEX-4T-2原覈錶達載體中可穫高效錶達,所純化蛋白具有類似于乙二醛酶Ⅰ的作用.
목적 통과원핵표체획득대량지방신단백질My027,병재체외초보연구기생물활성.방법 RT-PCR법확증출My027편단,삽입원핵표체재체pGEx-4T-2,구건질립pGEX-My027.전화BL-21균,IPTG저온유도표체융합단백,경친화층석법획득융합단백,이용SDS-PAGE、Western인적급질보진행탑정.재환원성곡광감태존재적조건하,장순화득도적융합단백작용우을이철매Ⅰ적저물갑기을이철,통과분광광도법유측산물물유산곡광감태적생성.결과 창융합단백이수용형식분비우대장애희균BL-21포장중,순화후적목적단백 SDS-PAGE、Western인적급질보증실고효표체,안기산서렬정학.결론 표인지방세포신단백질My027재pGEX-4T-2원핵표체재체중가획고효표체,소순화단백구유유사우을이철매Ⅰ적작용.
