四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2010年
3期
394-397
,共4页
薛红利%蔺诗佳%何东%孟文彤%牛挺
薛紅利%藺詩佳%何東%孟文彤%牛挺
설홍리%린시가%하동%맹문동%우정
mIFN-γ基因%腺病毒载体%重组
mIFN-γ基因%腺病毒載體%重組
mIFN-γ기인%선병독재체%중조
目的 构建含有小鼠干扰素-γ(mIFN-γ)基因的腺病毒载体,为探索IFN-γ在肝纤维化治疗中的作用研究奠定基础.方法 从含有mIFN-γ 基因的质粒载体pORF5-mIFN-γ 中PCR扩增出mIFN-γ 基因片段,双酶切将该基因克隆入穿梭载体pAdTrack-CMV中,限制性内切酶PmeⅠ线性化pAdTrack-CMV-mIFN-γ,转化含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌株BJ5183细胞,同源重组.卡那霉素及酶切筛选出重组子pAd-mIFN-γ,内切酶PacⅠ线性化重组子,用磷酸钙法转染细胞株AD-293进行包装,收集病毒进行鉴定.结果 PCR后测序获得mIFN-γ基因,全长468 bp,与GenBank中发表的mIFN-γ 基因核苷酸序列完全一致.经酶切和PCR证实各中间过程载体均含有目的 基因.包装的病毒Ad-mIFN-γ在转染的4～6 d观察到荧光产生,8～11 d荧光逐渐增加,12 d收集病毒液.蛋白酶K裂解重组腺病毒,经PCR和Western blot方法鉴定,证实携带有目的 基因mIFN-γ.结论 大肠杆菌内同源重组法能有效和较为方便地构建出含有目的 基因的腺病毒载体pAd-mIFN-γ,重组子能够在AD-293细胞中进行包装和扩增,病毒包装的成功为进一步研究mIFN-γ 基因治疗小鼠肝纤维化提供了一个良好的转导载体.
目的 構建含有小鼠榦擾素-γ(mIFN-γ)基因的腺病毒載體,為探索IFN-γ在肝纖維化治療中的作用研究奠定基礎.方法 從含有mIFN-γ 基因的質粒載體pORF5-mIFN-γ 中PCR擴增齣mIFN-γ 基因片段,雙酶切將該基因剋隆入穿梭載體pAdTrack-CMV中,限製性內切酶PmeⅠ線性化pAdTrack-CMV-mIFN-γ,轉化含有腺病毒骨架質粒pAdEasy-1的大腸桿菌株BJ5183細胞,同源重組.卡那黴素及酶切篩選齣重組子pAd-mIFN-γ,內切酶PacⅠ線性化重組子,用燐痠鈣法轉染細胞株AD-293進行包裝,收集病毒進行鑒定.結果 PCR後測序穫得mIFN-γ基因,全長468 bp,與GenBank中髮錶的mIFN-γ 基因覈苷痠序列完全一緻.經酶切和PCR證實各中間過程載體均含有目的 基因.包裝的病毒Ad-mIFN-γ在轉染的4～6 d觀察到熒光產生,8～11 d熒光逐漸增加,12 d收集病毒液.蛋白酶K裂解重組腺病毒,經PCR和Western blot方法鑒定,證實攜帶有目的 基因mIFN-γ.結論 大腸桿菌內同源重組法能有效和較為方便地構建齣含有目的 基因的腺病毒載體pAd-mIFN-γ,重組子能夠在AD-293細胞中進行包裝和擴增,病毒包裝的成功為進一步研究mIFN-γ 基因治療小鼠肝纖維化提供瞭一箇良好的轉導載體.
목적 구건함유소서간우소-γ(mIFN-γ)기인적선병독재체,위탐색IFN-γ재간섬유화치료중적작용연구전정기출.방법 종함유mIFN-γ 기인적질립재체pORF5-mIFN-γ 중PCR확증출mIFN-γ 기인편단,쌍매절장해기인극륭입천사재체pAdTrack-CMV중,한제성내절매PmeⅠ선성화pAdTrack-CMV-mIFN-γ,전화함유선병독골가질립pAdEasy-1적대장간균주BJ5183세포,동원중조.잡나매소급매절사선출중조자pAd-mIFN-γ,내절매PacⅠ선성화중조자,용린산개법전염세포주AD-293진행포장,수집병독진행감정.결과 PCR후측서획득mIFN-γ기인,전장468 bp,여GenBank중발표적mIFN-γ 기인핵감산서렬완전일치.경매절화PCR증실각중간과정재체균함유목적 기인.포장적병독Ad-mIFN-γ재전염적4～6 d관찰도형광산생,8～11 d형광축점증가,12 d수집병독액.단백매K렬해중조선병독,경PCR화Western blot방법감정,증실휴대유목적 기인mIFN-γ.결론 대장간균내동원중조법능유효화교위방편지구건출함유목적 기인적선병독재체pAd-mIFN-γ,중조자능구재AD-293세포중진행포장화확증,병독포장적성공위진일보연구mIFN-γ 기인치료소서간섬유화제공료일개량호적전도재체.
