华北农学报
華北農學報
화북농학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA
2010年
3期
9-13
,共5页
王芳%胡波%任雪枫%范志宇%张则斌%徐为中%何孔旺
王芳%鬍波%任雪楓%範誌宇%張則斌%徐為中%何孔旺
왕방%호파%임설풍%범지우%장칙빈%서위중%하공왕
家兔%γ-干扰素%克隆%重组杆状病毒
傢兔%γ-榦擾素%剋隆%重組桿狀病毒
가토%γ-간우소%극륭%중조간상병독
用RT-PCR方法对ConA刺激后的新西兰白兔外周血淋巴细胞(PBMC)扩增家兔γ-干扰素(IFN-γ)基因并进行测序,测序结果显示,与GenBank公布的序列核苷酸同源性达到99.4%～99.6%,氨基酸同源性为98.8%～99.4%;然后通过克隆、转化将家兔γ-干扰素基因转入转移载体pFastBacTM1,得到重组转移载体pFastBacTM1-IFN-γ,用pFastBacTM1-IFN-γ转化含有穿梭载体Bacmid的大肠杆菌 DH10Bac 感受态细胞,经筛选得到重组穿梭载体Bacmid-IFN-γ,用此质粒转染Sf9昆虫细胞,得到重组病毒rAcV-Bac-IFN-γ,经RT-PCR鉴定,结果显示重组IFN-γ在Sf9昆虫细胞中得到表达.用兔IFN-γ ELISA试剂盒测得重组兔IFN-γ的浓度为1 950 pg/mL.细胞病变抑制法结果显示,重组兔IFN-γ在MDCK上显示了较高的抗病毒活性,并测得重组兔IFN-γ的活性约为5.12×105 U/mg.
用RT-PCR方法對ConA刺激後的新西蘭白兔外週血淋巴細胞(PBMC)擴增傢兔γ-榦擾素(IFN-γ)基因併進行測序,測序結果顯示,與GenBank公佈的序列覈苷痠同源性達到99.4%～99.6%,氨基痠同源性為98.8%～99.4%;然後通過剋隆、轉化將傢兔γ-榦擾素基因轉入轉移載體pFastBacTM1,得到重組轉移載體pFastBacTM1-IFN-γ,用pFastBacTM1-IFN-γ轉化含有穿梭載體Bacmid的大腸桿菌 DH10Bac 感受態細胞,經篩選得到重組穿梭載體Bacmid-IFN-γ,用此質粒轉染Sf9昆蟲細胞,得到重組病毒rAcV-Bac-IFN-γ,經RT-PCR鑒定,結果顯示重組IFN-γ在Sf9昆蟲細胞中得到錶達.用兔IFN-γ ELISA試劑盒測得重組兔IFN-γ的濃度為1 950 pg/mL.細胞病變抑製法結果顯示,重組兔IFN-γ在MDCK上顯示瞭較高的抗病毒活性,併測得重組兔IFN-γ的活性約為5.12×105 U/mg.
용RT-PCR방법대ConA자격후적신서란백토외주혈림파세포(PBMC)확증가토γ-간우소(IFN-γ)기인병진행측서,측서결과현시,여GenBank공포적서렬핵감산동원성체도99.4%～99.6%,안기산동원성위98.8%～99.4%;연후통과극륭、전화장가토γ-간우소기인전입전이재체pFastBacTM1,득도중조전이재체pFastBacTM1-IFN-γ,용pFastBacTM1-IFN-γ전화함유천사재체Bacmid적대장간균 DH10Bac 감수태세포,경사선득도중조천사재체Bacmid-IFN-γ,용차질립전염Sf9곤충세포,득도중조병독rAcV-Bac-IFN-γ,경RT-PCR감정,결과현시중조IFN-γ재Sf9곤충세포중득도표체.용토IFN-γ ELISA시제합측득중조토IFN-γ적농도위1 950 pg/mL.세포병변억제법결과현시,중조토IFN-γ재MDCK상현시료교고적항병독활성,병측득중조토IFN-γ적활성약위5.12×105 U/mg.
