动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2010年
8期
1-7
,共7页
陈华涛%胡林勇%杨艳%李倩%靳亚平
陳華濤%鬍林勇%楊豔%李倩%靳亞平
진화도%호림용%양염%리천%근아평
奶山羊%成纤维细胞%SRY基因%性别鉴定
奶山羊%成纖維細胞%SRY基因%性彆鑒定
내산양%성섬유세포%SRY기인%성별감정
为了探索和建立奶山羊胎儿成纤维细胞体外分离培养及性别鉴定的技术方法,获得转基因克隆羊的供体细胞,本试验用组织块培养法分离纯化得到两株奶山羊胎儿成纤维细胞系,进行细胞形态观察、生长曲线及细胞周期和倍性分析.同时根据GenBank上发布的山羊SRY基因设计合成一对PCR引物作为性别鉴定引物,另外根据山羊BLG基因序列设计一对引物作为内参引物,建立PCR反应体系对两株胎儿成纤维细胞系进行性别鉴定.结果表明,分离的胎儿成纤维细胞活力良好,可在体外快速生长、增殖、稳定培养;阳性对照和山羊胎儿成纤维细胞系2经PCR扩增得到337 bp片段和498 bp的BLG基因片段,而阴性对照和山羊胎儿成纤维细胞系1经PCR扩增得到498 bp的β-乳球蛋白基因片段.将337 bp片段和pMD19-T载体连接,构建重组载体pSRY,通过测序证明337 bp片段为SRY基因片段.这说明有337 bp扩增带的细胞系为雄性,无337 bp扩增带的细胞系为雌性.本试验为转基因奶山羊新品种的培育奠定了基础.
為瞭探索和建立奶山羊胎兒成纖維細胞體外分離培養及性彆鑒定的技術方法,穫得轉基因剋隆羊的供體細胞,本試驗用組織塊培養法分離純化得到兩株奶山羊胎兒成纖維細胞繫,進行細胞形態觀察、生長麯線及細胞週期和倍性分析.同時根據GenBank上髮佈的山羊SRY基因設計閤成一對PCR引物作為性彆鑒定引物,另外根據山羊BLG基因序列設計一對引物作為內參引物,建立PCR反應體繫對兩株胎兒成纖維細胞繫進行性彆鑒定.結果錶明,分離的胎兒成纖維細胞活力良好,可在體外快速生長、增殖、穩定培養;暘性對照和山羊胎兒成纖維細胞繫2經PCR擴增得到337 bp片段和498 bp的BLG基因片段,而陰性對照和山羊胎兒成纖維細胞繫1經PCR擴增得到498 bp的β-乳毬蛋白基因片段.將337 bp片段和pMD19-T載體連接,構建重組載體pSRY,通過測序證明337 bp片段為SRY基因片段.這說明有337 bp擴增帶的細胞繫為雄性,無337 bp擴增帶的細胞繫為雌性.本試驗為轉基因奶山羊新品種的培育奠定瞭基礎.
위료탐색화건립내산양태인성섬유세포체외분리배양급성별감정적기술방법,획득전기인극륭양적공체세포,본시험용조직괴배양법분리순화득도량주내산양태인성섬유세포계,진행세포형태관찰、생장곡선급세포주기화배성분석.동시근거GenBank상발포적산양SRY기인설계합성일대PCR인물작위성별감정인물,령외근거산양BLG기인서렬설계일대인물작위내삼인물,건립PCR반응체계대량주태인성섬유세포계진행성별감정.결과표명,분리적태인성섬유세포활력량호,가재체외쾌속생장、증식、은정배양;양성대조화산양태인성섬유세포계2경PCR확증득도337 bp편단화498 bp적BLG기인편단,이음성대조화산양태인성섬유세포계1경PCR확증득도498 bp적β-유구단백기인편단.장337 bp편단화pMD19-T재체련접,구건중조재체pSRY,통과측서증명337 bp편단위SRY기인편단.저설명유337 bp확증대적세포계위웅성,무337 bp확증대적세포계위자성.본시험위전기인내산양신품충적배육전정료기출.
