四川农业大学学报
四川農業大學學報
사천농업대학학보
JOURNAL OF SICHUAN AGRICULTURAL UNIVERSITY
2011年
2期
269-273
,共5页
刘菲%高丽芹%程安春%汪铭书%韩清林%赵婷婷%唐卫杰%严晓玲
劉菲%高麗芹%程安春%汪銘書%韓清林%趙婷婷%唐衛傑%嚴曉玲
류비%고려근%정안춘%왕명서%한청림%조정정%당위걸%엄효령
天府肉鹅%α干扰素%原核表达%抗病毒活性%水泡性口炎病毒
天府肉鵝%α榦擾素%原覈錶達%抗病毒活性%水泡性口炎病毒
천부육아%α간우소%원핵표체%항병독활성%수포성구염병독
参照已克隆的天府肉鹅IFN-α完整ORF基因序列设计引物,克隆成熟肽基因,与载体pET32a连接,构建原核表达载体,并在表达菌Rosetta中表达,SDS-PAGE分析鉴定,通过Ni-IMAC亲和层析纯化和稀释透析复性后,采用微量细胞病变抑制法分析测定IFN的抗病毒活性.结果显示,IFN-α成熟肽基因全长486 bp,共编码161个氨基酸；成功构建了原核表达载体pET32a-mGoIFN-α并得到表达,SDS-PAGE和Western-blot分析表达蛋白的大小为38 ku；纯化复性后的表达蛋白抗水泡性口炎病毒(VSV)活性的比活力为5.52×103U/mg,表明重组蛋白具有良好的抗病毒活性.
參照已剋隆的天府肉鵝IFN-α完整ORF基因序列設計引物,剋隆成熟肽基因,與載體pET32a連接,構建原覈錶達載體,併在錶達菌Rosetta中錶達,SDS-PAGE分析鑒定,通過Ni-IMAC親和層析純化和稀釋透析複性後,採用微量細胞病變抑製法分析測定IFN的抗病毒活性.結果顯示,IFN-α成熟肽基因全長486 bp,共編碼161箇氨基痠；成功構建瞭原覈錶達載體pET32a-mGoIFN-α併得到錶達,SDS-PAGE和Western-blot分析錶達蛋白的大小為38 ku；純化複性後的錶達蛋白抗水泡性口炎病毒(VSV)活性的比活力為5.52×103U/mg,錶明重組蛋白具有良好的抗病毒活性.
삼조이극륭적천부육아IFN-α완정ORF기인서렬설계인물,극륭성숙태기인,여재체pET32a련접,구건원핵표체재체,병재표체균Rosetta중표체,SDS-PAGE분석감정,통과Ni-IMAC친화층석순화화희석투석복성후,채용미량세포병변억제법분석측정IFN적항병독활성.결과현시,IFN-α성숙태기인전장486 bp,공편마161개안기산；성공구건료원핵표체재체pET32a-mGoIFN-α병득도표체,SDS-PAGE화Western-blot분석표체단백적대소위38 ku；순화복성후적표체단백항수포성구염병독(VSV)활성적비활력위5.52×103U/mg,표명중조단백구유량호적항병독활성.
