CAJ | 학술논문

目前发现GOLPH2蛋白与肝癌密切相关,将golph2基因进行克隆、表达并制备多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础.应用RT-PCR技术,从人肝癌细胞系HepG2细胞中扩增得到golph2 cDNA,将其克隆到原核表达载体pET21a(+)-TRX内、转化大肠杆菌DHSa,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.His-tag磁珠纯化试剂盒纯化重组蛋白GOLPH2,SDS-PAGE鉴定.将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,采用ELISA、Western blot方法检测抗体的灵敏度和特异性,并测定临床血清标本中GOLPH2蛋白水平.成功地构建了表达TRX-GOLPH2融合蛋白的原核表达质粒pET21a(+)-TRX-GOLPH2.并在大肠杆菌BL21(DE3)内得以高效表达,且以可溶性的形式存在.SDS-PAGE和Western blot证实,重组GOLPH2蛋白质与预期结果一致.抗血清能够特异地识别52 kD重组蛋白、73 kD细胞裂解液和血清蛋白质.成功制备了GOLPH2蛋白质和多克隆抗体,能用于后续研究.
목전발현GOLPH2단백여간암밀절상관,장golph2기인진행극륭、표체병제비다극륭항체,위진일보연구기공능전정기출.응용RT-PCR기술,종인간암세포계HepG2세포중확증득도golph2 cDNA,장기극륭도원핵표체재체pET21a(+)-TRX내、전화대장간균DHSa,용IPTG유도기재대장간균BL21(DE3)중표체.His-tag자주순화시제합순화중조단백GOLPH2,SDS-PAGE감정.장순화적중조단백면역BALB/c소서제비다극륭항체,채용ELISA、Western blot방법검측항체적령민도화특이성,병측정림상혈청표본중GOLPH2단백수평.성공지구건료표체TRX-GOLPH2융합단백적원핵표체질립pET21a(+)-TRX-GOLPH2.병재대장간균BL21(DE3)내득이고효표체,차이가용성적형식존재.SDS-PAGE화Western blot증실,중조GOLPH2단백질여예기결과일치.항혈청능구특이지식별52 kD중조단백、73 kD세포렬해액화혈청단백질.성공제비료GOLPH2단백질화다극륭항체,능용우후속연구.