畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2011年
12期
1750-1755
,共6页
陈西%王湘如%徐晓娟%郭凤娟%陈焕春%蔡旭旺
陳西%王湘如%徐曉娟%郭鳳娟%陳煥春%蔡旭旺
진서%왕상여%서효연%곽봉연%진환춘%채욱왕
副猪嗜血杆菌%细胞致死膨胀毒素%毒素%细胞毒性
副豬嗜血桿菌%細胞緻死膨脹毒素%毒素%細胞毒性
부저기혈간균%세포치사팽창독소%독소%세포독성
本研究旨在原核表达副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素(Cytolethal distending toxin,CDT),并作用于猪髋动脉内皮细胞(Pig iliac endothelial cells,PIEC),以研究其细胞毒性.根据本实验室完成的副猪嗜血杆菌SH 0165株(血清5型)全基因组序列,针对cdtA、cdtB和cdtC基因序列设计引物,扩增的基因片段大小分别约为681、834和531 bp.将靶基因克隆到原核表达载体pET28a中,再转化到E.coliBL21( DE3),IPTG诱导表达3h,SDSPAGE和Western blot检测证实表达产物以包涵体形式存在,大小分别约36、34和28 ku.通过体外重构毒素与PIEC细胞作用3h,继续培养72 h观察细胞形态学变化.结果表明,CdtABC全毒素致PIEC细胞膨胀、空泡形成、细胞凋亡等,而其他试验组变化不显著.结果提示,CDT毒素可能在细菌感染与致病中发挥着重要作用.
本研究旨在原覈錶達副豬嗜血桿菌細胞緻死膨脹毒素(Cytolethal distending toxin,CDT),併作用于豬髖動脈內皮細胞(Pig iliac endothelial cells,PIEC),以研究其細胞毒性.根據本實驗室完成的副豬嗜血桿菌SH 0165株(血清5型)全基因組序列,針對cdtA、cdtB和cdtC基因序列設計引物,擴增的基因片段大小分彆約為681、834和531 bp.將靶基因剋隆到原覈錶達載體pET28a中,再轉化到E.coliBL21( DE3),IPTG誘導錶達3h,SDSPAGE和Western blot檢測證實錶達產物以包涵體形式存在,大小分彆約36、34和28 ku.通過體外重構毒素與PIEC細胞作用3h,繼續培養72 h觀察細胞形態學變化.結果錶明,CdtABC全毒素緻PIEC細胞膨脹、空泡形成、細胞凋亡等,而其他試驗組變化不顯著.結果提示,CDT毒素可能在細菌感染與緻病中髮揮著重要作用.
본연구지재원핵표체부저기혈간균세포치사팽창독소(Cytolethal distending toxin,CDT),병작용우저관동맥내피세포(Pig iliac endothelial cells,PIEC),이연구기세포독성.근거본실험실완성적부저기혈간균SH 0165주(혈청5형)전기인조서렬,침대cdtA、cdtB화cdtC기인서렬설계인물,확증적기인편단대소분별약위681、834화531 bp.장파기인극륭도원핵표체재체pET28a중,재전화도E.coliBL21( DE3),IPTG유도표체3h,SDSPAGE화Western blot검측증실표체산물이포함체형식존재,대소분별약36、34화28 ku.통과체외중구독소여PIEC세포작용3h,계속배양72 h관찰세포형태학변화.결과표명,CdtABC전독소치PIEC세포팽창、공포형성、세포조망등,이기타시험조변화불현저.결과제시,CDT독소가능재세균감염여치병중발휘착중요작용.
