CAJ | 학술논문

将我国黑龙江省某鸡场发病症状及病理变化疑似鸡传染性支气管炎的濒死病鸡肾脏组织加PBS缓冲液后研磨,-70°C/37°C反复冻融三次,离心并进行无菌过滤后接种10日龄SPF鸡胚.72小时取尿囊液进行电镜观察并用1%胰酶处理,观察对鸡红细胞的凝集情况.结果发现尿囊液中存在典型的冠状病毒粒子,而且用胰酶处理过的尿囊液能够凝集SPF鸡的红细胞,初步鉴定为鸡的传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus,IBV).将该病毒尿囊液在10日龄SPF鸡胚上连续传8代,通过病毒对鸡胚的致病作用、病毒在电镜下的形态特征、病毒在鸡胚中的增殖动态以及病毒凝集鸡红细胞的特性等对该毒株进行研究.结果表明:该毒株的第一代尿囊液中病毒的滴度很高,可达到81og2,且胚体表现轻度出血,但实质器官未见肉眼可见的病变;第二代病毒即可致胚体严重病变;病毒在鸡胚中随着接种病毒后时间的延长,其滴度逐渐增高;经1%胰酶处理后的各代病毒尿囊液可凝集鸡红细胞.鸡胚的第三代病毒尿囊液(命名为LD3/01/07)分别接种1日龄和30日龄的SPF鸡,发现对不同日龄的鸡表现不同的致病性,对1日龄接种鸡和同笼饲养的对照鸡致病力高,发病率和致死率均为100%,(接种和同居感染各4只,均死亡),30日龄接种和同居感染鸡发病率为100%,致死率各均为20%(接种和同居感染各5只,各死亡1/5).死亡鸡肾脏病变明显,表现肾脏肿大,纹理清晰,病程较长的死亡鸡肾脏呈典型的花斑肾.部分鸡表现卡他性支气管炎,支气管和输卵管有出血现象.同时本实验应用反转录-聚合酶链式反应(Reversetranscription-polymerase Chain Reaction,RT-PCR)技术对LD3/01/07的核衣壳蛋白(Nucleocapsid,N)基因进行扩增、克隆和序列测定,结果表明该基因具有IBV N基因的共有分子特征,与参考毒株IBV M41的N基因同源性达88.2%.以上研究结果表明,我们分离到的是鸡传染性支气管炎病毒,对1日龄鸡致病力强,具有致肾脏病变的组织嗜性. 將我國黑龍江省某鷄場髮病癥狀及病理變化疑似鷄傳染性支氣管炎的瀕死病鷄腎髒組織加PBS緩遲液後研磨,-70°C/37°C反複凍融三次,離心併進行無菌過濾後接種10日齡SPF鷄胚.72小時取尿囊液進行電鏡觀察併用1%胰酶處理,觀察對鷄紅細胞的凝集情況.結果髮現尿囊液中存在典型的冠狀病毒粒子,而且用胰酶處理過的尿囊液能夠凝集SPF鷄的紅細胞,初步鑒定為鷄的傳染性支氣管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus,IBV).將該病毒尿囊液在10日齡SPF鷄胚上連續傳8代,通過病毒對鷄胚的緻病作用、病毒在電鏡下的形態特徵、病毒在鷄胚中的增殖動態以及病毒凝集鷄紅細胞的特性等對該毒株進行研究.結果錶明:該毒株的第一代尿囊液中病毒的滴度很高,可達到81og2,且胚體錶現輕度齣血,但實質器官未見肉眼可見的病變;第二代病毒即可緻胚體嚴重病變;病毒在鷄胚中隨著接種病毒後時間的延長,其滴度逐漸增高;經1%胰酶處理後的各代病毒尿囊液可凝集鷄紅細胞.鷄胚的第三代病毒尿囊液(命名為LD3/01/07)分彆接種1日齡和30日齡的SPF鷄,髮現對不同日齡的鷄錶現不同的緻病性,對1日齡接種鷄和同籠飼養的對照鷄緻病力高,髮病率和緻死率均為100%,(接種和同居感染各4隻,均死亡),30日齡接種和同居感染鷄髮病率為100%,緻死率各均為20%(接種和同居感染各5隻,各死亡1/5).死亡鷄腎髒病變明顯,錶現腎髒腫大,紋理清晰,病程較長的死亡鷄腎髒呈典型的花斑腎.部分鷄錶現卡他性支氣管炎,支氣管和輸卵管有齣血現象.同時本實驗應用反轉錄-聚閤酶鏈式反應(Reversetranscription-polymerase Chain Reaction,RT-PCR)技術對LD3/01/07的覈衣殼蛋白(Nucleocapsid,N)基因進行擴增、剋隆和序列測定,結果錶明該基因具有IBV N基因的共有分子特徵,與參攷毒株IBV M41的N基因同源性達88.2%.以上研究結果錶明,我們分離到的是鷄傳染性支氣管炎病毒,對1日齡鷄緻病力彊,具有緻腎髒病變的組織嗜性.
장아국흑룡강성모계장발병증상급병리변화의사계전염성지기관염적빈사병계신장조직가PBS완충액후연마,-70°C/37°C반복동융삼차,리심병진행무균과려후접충10일령SPF계배.72소시취뇨낭액진행전경관찰병용1%이매처리,관찰대계홍세포적응집정황.결과발현뇨낭액중존재전형적관상병독입자,이차용이매처리과적뇨낭액능구응집SPF계적홍세포,초보감정위계적전염성지기관염병독(Infectious Bronchitis Virus,IBV).장해병독뇨낭액재10일령SPF계배상련속전8대,통과병독대계배적치병작용、병독재전경하적형태특정、병독재계배중적증식동태이급병독응집계홍세포적특성등대해독주진행연구.결과표명:해독주적제일대뇨낭액중병독적적도흔고,가체도81og2,차배체표현경도출혈,단실질기관미견육안가견적병변;제이대병독즉가치배체엄중병변;병독재계배중수착접충병독후시간적연장,기적도축점증고;경1%이매처리후적각대병독뇨낭액가응집계홍세포.계배적제삼대병독뇨낭액(명명위LD3/01/07)분별접충1일령화30일령적SPF계,발현대불동일령적계표현불동적치병성,대1일령접충계화동롱사양적대조계치병력고,발병솔화치사솔균위100%,(접충화동거감염각4지,균사망),30일령접충화동거감염계발병솔위100%,치사솔각균위20%(접충화동거감염각5지,각사망1/5).사망계신장병변명현,표현신장종대,문리청석,병정교장적사망계신장정전형적화반신.부분계표현잡타성지기관염,지기관화수란관유출혈현상.동시본실험응용반전록-취합매련식반응(Reversetranscription-polymerase Chain Reaction,RT-PCR)기술대LD3/01/07적핵의각단백(Nucleocapsid,N)기인진행확증、극륭화서렬측정,결과표명해기인구유IBV N기인적공유분자특정,여삼고독주IBV M41적N기인동원성체88.2%.이상연구결과표명,아문분리도적시계전염성지기관염병독,대1일령계치병력강,구유치신장병변적조직기성.