中国科学C辑
中國科學C輯
중국과학C집
SCIENCE IN CHINA (SERIES C)
2000年
3期
266-275
,共10页
聂丽平%王韫恂%贾君永%田宇清%谭华荣
聶麗平%王韞恂%賈君永%田宇清%譚華榮
섭려평%왕운순%가군영%전우청%담화영
链霉菌%发育分化%白基因%互补克隆
鏈黴菌%髮育分化%白基因%互補剋隆
련매균%발육분화%백기인%호보극륭
以Sau3AI部分酶切野生型圈卷产色链霉菌7100(Streptomyces ansochromogenes 7100)染色体DNA,回收3～6 kb的DNA片段,插入到链霉菌表达载体pIJ702的BglⅡ位点,转化圈卷产色链霉菌白色突变株W19,得到了近3 000个转化子,从中筛选到了两个具有硫链丝菌素抗性和野生型灰色表型的转化子.进行了质粒提取和酶切分析,两个重组质粒分别命名为pNL-1和pNL-2(分别含有约5.2和5.8 kb的外源片段).通过亚克隆及突变株互补实验,将互补W19的基因定位在了1.25 kb的Pst Ⅰ-Apa Ⅰ片段上.DNA序列分析结果表明,该DNA片段中含有一个完整的可读框(ORF1),编码一个由295个氨基酸组成的蛋白质,该基因命名为sawB.利用Blast程序在蛋白数据库中比较发现,SawB与天蓝色链霉菌的一个转录调控蛋白WhiH具有81%的一致性.利用基因破坏策略研究了sawB的功能,结果发现,野生型菌株的sawB基因破坏后,丧失了孢子形成能力,由灰色表型转变为白色表型.显微镜下观察sawB突变株的气生菌丝长而直,顶部略有波浪形卷曲,螺旋程度有所下降.由此可知,sawB是与圈卷产色链霉菌形态分化有关的一个重要基因,它与菌丝螺旋及孢子形成直接相关.sawB的异源表达分析表明,sawB可互补天蓝色链霉菌whiH突变株C119,使之恢复到野生型表型,产生紧密螺旋及丰富的灰色孢子.
以Sau3AI部分酶切野生型圈捲產色鏈黴菌7100(Streptomyces ansochromogenes 7100)染色體DNA,迴收3～6 kb的DNA片段,插入到鏈黴菌錶達載體pIJ702的BglⅡ位點,轉化圈捲產色鏈黴菌白色突變株W19,得到瞭近3 000箇轉化子,從中篩選到瞭兩箇具有硫鏈絲菌素抗性和野生型灰色錶型的轉化子.進行瞭質粒提取和酶切分析,兩箇重組質粒分彆命名為pNL-1和pNL-2(分彆含有約5.2和5.8 kb的外源片段).通過亞剋隆及突變株互補實驗,將互補W19的基因定位在瞭1.25 kb的Pst Ⅰ-Apa Ⅰ片段上.DNA序列分析結果錶明,該DNA片段中含有一箇完整的可讀框(ORF1),編碼一箇由295箇氨基痠組成的蛋白質,該基因命名為sawB.利用Blast程序在蛋白數據庫中比較髮現,SawB與天藍色鏈黴菌的一箇轉錄調控蛋白WhiH具有81%的一緻性.利用基因破壞策略研究瞭sawB的功能,結果髮現,野生型菌株的sawB基因破壞後,喪失瞭孢子形成能力,由灰色錶型轉變為白色錶型.顯微鏡下觀察sawB突變株的氣生菌絲長而直,頂部略有波浪形捲麯,螺鏇程度有所下降.由此可知,sawB是與圈捲產色鏈黴菌形態分化有關的一箇重要基因,它與菌絲螺鏇及孢子形成直接相關.sawB的異源錶達分析錶明,sawB可互補天藍色鏈黴菌whiH突變株C119,使之恢複到野生型錶型,產生緊密螺鏇及豐富的灰色孢子.
이Sau3AI부분매절야생형권권산색련매균7100(Streptomyces ansochromogenes 7100)염색체DNA,회수3～6 kb적DNA편단,삽입도련매균표체재체pIJ702적BglⅡ위점,전화권권산색련매균백색돌변주W19,득도료근3 000개전화자,종중사선도료량개구유류련사균소항성화야생형회색표형적전화자.진행료질립제취화매절분석,량개중조질립분별명명위pNL-1화pNL-2(분별함유약5.2화5.8 kb적외원편단).통과아극륭급돌변주호보실험,장호보W19적기인정위재료1.25 kb적Pst Ⅰ-Apa Ⅰ편단상.DNA서렬분석결과표명,해DNA편단중함유일개완정적가독광(ORF1),편마일개유295개안기산조성적단백질,해기인명명위sawB.이용Blast정서재단백수거고중비교발현,SawB여천람색련매균적일개전록조공단백WhiH구유81%적일치성.이용기인파배책략연구료sawB적공능,결과발현,야생형균주적sawB기인파배후,상실료포자형성능력,유회색표형전변위백색표형.현미경하관찰sawB돌변주적기생균사장이직,정부략유파랑형권곡,라선정도유소하강.유차가지,sawB시여권권산색련매균형태분화유관적일개중요기인,타여균사라선급포자형성직접상관.sawB적이원표체분석표명,sawB가호보천람색련매균whiH돌변주C119,사지회복도야생형표형,산생긴밀라선급봉부적회색포자.
