CAJ | 학술논문

通过电穿孔的方法,将含有新霉素抗性(Neor)基因和增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的双标记选择载体导入胎牛输卵管上皮细胞,获得了转基因细胞株.以转基因细胞为核供体,进行了牛的体细胞核移植.重构胚胎424枚,其中208枚体外发育至囊胚,囊胚发育率为49.1%.选择第7天转基因囊胚17枚移入17头同期发情的受体牛子宫角内,共有5头受体牛妊娠,妊娠率为29.4%.经过正常的体内发育,有3头转基因克隆牛出生,产犊率为17.6%.PCR和Southern检测结果表明,3头转基因克隆牛的基因组中都整合有外源目标基因.并且,绿色荧光蛋白在转基因克隆牛的耳部皮肤组织以及从耳部皮肤组织分离出的成纤维细胞中均有表达.上述结果显示,通过体细胞核移植技术可以有效生产转基因牛;所构建的双标记选择载体可以有效筛选出转基因细胞和转基因克隆胚胎,应用于转基因克隆动物的生产,确保所培育的克隆动物均为转基因动物.
통과전천공적방법,장함유신매소항성(Neor)기인화증강록색형광단백(EGFP)기인적쌍표기선택재체도입태우수란관상피세포,획득료전기인세포주.이전기인세포위핵공체,진행료우적체세포핵이식.중구배태424매,기중208매체외발육지낭배,낭배발육솔위49.1%.선택제7천전기인낭배17매이입17두동기발정적수체우자궁각내,공유5두수체우임신,임신솔위29.4%.경과정상적체내발육,유3두전기인극륭우출생,산독솔위17.6%.PCR화Southern검측결과표명,3두전기인극륭우적기인조중도정합유외원목표기인.병차,록색형광단백재전기인극륭우적이부피부조직이급종이부피부조직분리출적성섬유세포중균유표체.상술결과현시,통과체세포핵이식기술가이유효생산전기인우;소구건적쌍표기선택재체가이유효사선출전기인세포화전기인극륭배태,응용우전기인극륭동물적생산,학보소배육적극륭동물균위전기인동물.