CAJ | 학술논문

为了建立大鼠脑微血管内皮细胞体外培养模型,探索纯度较高的大鼠脑微血管内皮细胞分离和原代培养的方法并进行形态学观察.采用2～3周龄的SD大鼠,解剖得到大脑皮质,两次酶消化及牛血清白蛋白或葡聚糖和Pefcoll梯度离心获得较纯的脑微血管段后,接种于涂布基质的培养皿进行原代培养;培养的细胞采用相差显微镜形态学观察、透射电镜观察及Ⅷ因子相关抗原免疫组化检测鉴定.结果发现,培养12 h即可见细胞从贴壁的脑微血管段周围长出,细胞呈短梭形,区域性单层生长,5～7天内皮细胞融合,内皮细胞纯度达90%以上;内皮细胞的贴壁和生长有赖于所涂布的基质,纤连蛋白/Ⅳ型胶原优于鼠尾胶和明胶;Ⅷ因子相关抗原免疫组化检测内皮细胞表达阳性,透射电镜观察可见相邻内皮细胞间存在紧密连接结构.提示该方法能成功进行纯度较高的大鼠脑微血管内皮细胞原代培养,可用于脑微血管内皮的生理、生化及药理学研究,亦可用于构建大鼠血脑屏障模型.
위료건립대서뇌미혈관내피세포체외배양모형,탐색순도교고적대서뇌미혈관내피세포분리화원대배양적방법병진행형태학관찰.채용2～3주령적SD대서,해부득도대뇌피질,량차매소화급우혈청백단백혹포취당화Pefcoll제도리심획득교순적뇌미혈관단후,접충우도포기질적배양명진행원대배양;배양적세포채용상차현미경형태학관찰、투사전경관찰급Ⅷ인자상관항원면역조화검측감정.결과발현,배양12 h즉가견세포종첩벽적뇌미혈관단주위장출,세포정단사형,구역성단층생장,5～7천내피세포융합,내피세포순도체90%이상;내피세포적첩벽화생장유뢰우소도포적기질,섬련단백/Ⅳ형효원우우서미효화명효;Ⅷ인자상관항원면역조화검측내피세포표체양성,투사전경관찰가견상린내피세포간존재긴밀련접결구.제시해방법능성공진행순도교고적대서뇌미혈관내피세포원대배양,가용우뇌미혈관내피적생리、생화급약이학연구,역가용우구건대서혈뇌병장모형.