南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2006年
4期
483-485,489
,共4页
郭秋野%马文丽%张宝%吴清华%严律%郑文岭
郭鞦野%馬文麗%張寶%吳清華%嚴律%鄭文嶺
곽추야%마문려%장보%오청화%엄률%정문령
RNAi%siRNA%U6启动子%PCR表达框架%SH-SYSY细胞
RNAi%siRNA%U6啟動子%PCR錶達框架%SH-SYSY細胞
RNAi%siRNA%U6계동자%PCR표체광가%SH-SYSY세포
目的改进目前基于PCR的方法制备siRNA表达框,转染细胞后产生高效的RNA干扰作用.方法从K562细胞中提取基因组DNA,以此为模板,PCR扩增U6启动子序列并克隆至pMD18-T载体中,用载体上的引物进行扩增,所得产物即制成作为扩增siRNA表达框的模板.选择p53为靶基因,扩增制备siRNA表达框,测序验证后,转染SH-SY5Y细胞48h后提取RNA进行RT-PCR,检测RNA干扰的效应.结果测序结果表明所克隆的U6启动子序列正确.细胞转染表达框,在mRNA水平上,p53基因的表达明显受到了抑制.结论本实验所制作的基于PCR的方法制备siRNA表达框可以很好地应用于RNAi作用研究.
目的改進目前基于PCR的方法製備siRNA錶達框,轉染細胞後產生高效的RNA榦擾作用.方法從K562細胞中提取基因組DNA,以此為模闆,PCR擴增U6啟動子序列併剋隆至pMD18-T載體中,用載體上的引物進行擴增,所得產物即製成作為擴增siRNA錶達框的模闆.選擇p53為靶基因,擴增製備siRNA錶達框,測序驗證後,轉染SH-SY5Y細胞48h後提取RNA進行RT-PCR,檢測RNA榦擾的效應.結果測序結果錶明所剋隆的U6啟動子序列正確.細胞轉染錶達框,在mRNA水平上,p53基因的錶達明顯受到瞭抑製.結論本實驗所製作的基于PCR的方法製備siRNA錶達框可以很好地應用于RNAi作用研究.
목적개진목전기우PCR적방법제비siRNA표체광,전염세포후산생고효적RNA간우작용.방법종K562세포중제취기인조DNA,이차위모판,PCR확증U6계동자서렬병극륭지pMD18-T재체중,용재체상적인물진행확증,소득산물즉제성작위확증siRNA표체광적모판.선택p53위파기인,확증제비siRNA표체광,측서험증후,전염SH-SY5Y세포48h후제취RNA진행RT-PCR,검측RNA간우적효응.결과측서결과표명소극륭적U6계동자서렬정학.세포전염표체광,재mRNA수평상,p53기인적표체명현수도료억제.결론본실험소제작적기우PCR적방법제비siRNA표체광가이흔호지응용우RNAi작용연구.
