临床军医杂志
臨床軍醫雜誌
림상군의잡지
CLINICAL JOURNAL OF MEDICAL OFFICER
2008年
1期
1-6
,共6页
南清振%高蕾%张振书%杨希山%肖冰%姜泊
南清振%高蕾%張振書%楊希山%肖冰%薑泊
남청진%고뢰%장진서%양희산%초빙%강박
大肠肿瘤%噬菌体抗体库%Fab抗体%癌胚抗原
大腸腫瘤%噬菌體抗體庫%Fab抗體%癌胚抗原
대장종류%서균체항체고%Fab항체%암배항원
目的 构建及初步鉴定大肠癌噬菌体抗体Fab呈现库,筛选人CEA单克隆抗体,并进行序列分析.方法 分离大肠癌患者外周血淋巴细胞,提取淋巴细胞总RNA,逆转录成cDNA.用PCR扩增人全套抗体基因片段,克隆于pComb3载体,再经电穿孔转化大肠杆菌XL1-Blue菌株,形成噬菌体抗体库.以固相化CEA抗原淘筛抗体库,ELISA鉴定噬菌体抗体.其中一个阳性克隆进行测序.结果 逆转录PCR分别扩增出约680bp大小的κ、λ和Fd基因.PCR产物和载体经纯化、双酶切后进行连接转化,成功地构建了人源性Fab抗体基因库,库容量达2.1×107,Fab基因重组率为50%.以单抗捕获的CEA抗原淘洗4轮,出现特异性富集,阳性克隆经直接ELISA和交叉反应ELISA实验证实具有良好的抗CEA抗原特异性.DNA测序表明该抗体重链属IgG亚类并含有一条IgL亚类的轻链.结论 成功构建了大肠癌患者自然致敏抗体Fab段噬菌体呈现库,从中获得可与CEA抗原结合的噬菌体抗体,由此为大肠癌早期诊断及基因治疗提供了一种新的思路和方法.
目的 構建及初步鑒定大腸癌噬菌體抗體Fab呈現庫,篩選人CEA單剋隆抗體,併進行序列分析.方法 分離大腸癌患者外週血淋巴細胞,提取淋巴細胞總RNA,逆轉錄成cDNA.用PCR擴增人全套抗體基因片段,剋隆于pComb3載體,再經電穿孔轉化大腸桿菌XL1-Blue菌株,形成噬菌體抗體庫.以固相化CEA抗原淘篩抗體庫,ELISA鑒定噬菌體抗體.其中一箇暘性剋隆進行測序.結果 逆轉錄PCR分彆擴增齣約680bp大小的κ、λ和Fd基因.PCR產物和載體經純化、雙酶切後進行連接轉化,成功地構建瞭人源性Fab抗體基因庫,庫容量達2.1×107,Fab基因重組率為50%.以單抗捕穫的CEA抗原淘洗4輪,齣現特異性富集,暘性剋隆經直接ELISA和交扠反應ELISA實驗證實具有良好的抗CEA抗原特異性.DNA測序錶明該抗體重鏈屬IgG亞類併含有一條IgL亞類的輕鏈.結論 成功構建瞭大腸癌患者自然緻敏抗體Fab段噬菌體呈現庫,從中穫得可與CEA抗原結閤的噬菌體抗體,由此為大腸癌早期診斷及基因治療提供瞭一種新的思路和方法.
목적 구건급초보감정대장암서균체항체Fab정현고,사선인CEA단극륭항체,병진행서렬분석.방법 분리대장암환자외주혈림파세포,제취림파세포총RNA,역전록성cDNA.용PCR확증인전투항체기인편단,극륭우pComb3재체,재경전천공전화대장간균XL1-Blue균주,형성서균체항체고.이고상화CEA항원도사항체고,ELISA감정서균체항체.기중일개양성극륭진행측서.결과 역전록PCR분별확증출약680bp대소적κ、λ화Fd기인.PCR산물화재체경순화、쌍매절후진행련접전화,성공지구건료인원성Fab항체기인고,고용량체2.1×107,Fab기인중조솔위50%.이단항포획적CEA항원도세4륜,출현특이성부집,양성극륭경직접ELISA화교차반응ELISA실험증실구유량호적항CEA항원특이성.DNA측서표명해항체중련속IgG아류병함유일조IgL아류적경련.결론 성공구건료대장암환자자연치민항체Fab단서균체정현고,종중획득가여CEA항원결합적서균체항체,유차위대장암조기진단급기인치료제공료일충신적사로화방법.
