CAJ | 학술논문

目的:探讨丹参单体丹酚酸B(Salvianolie acid B,SalB)在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow rues-enchymal stem cells,MSCs)分化为心肌样细胞的情况及Nkx2.5、GATA-4 mRNA的表达,从而确定大鼠MSCs体外诱导为心肌样细胞的条件、规律及转化细胞的特点.方法:选用成年近交系Wistar大鼠,利用percoll分离液进行密度梯度离心法和直接贴壁法进行分离、提纯MSCs,并进行培养扩增.免疫组化方法对第9代MSCs表面抗原进行鉴定.分别应用10μmol/L5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)及250μg/L SalB联合5-aza(5-aza+SalB)对第9代的MSCs进行联合诱导24h,于诱导后第4周,用实时荧光定量RT-PCR法检测GATA-4和Nkx2.5基因表达.结果:①第9代MSCs免疫组化染色CIM4呈阳性表达,CD34呈阴性表达.②诱导4周后,细胞体积变小,可见由几个细胞连接形成的多核肌管样结构.5-az8组、5-aza+SalB组均出现明确的心肌早期分化基因与5-aza组相比,5-828+SalB组的NKx2.5、GA-TA-4 mRNA表达明显增加.结论:SalB具有促进5-aza诱导的MSCs向心肌样细胞分化的作用,并且在Nkx2.5基因表达上丹酚酸B的优势更加明显.
목적:탐토단삼단체단분산B(Salvianolie acid B,SalB)재체외유도대서골수간충질간세포(bone marrow rues-enchymal stem cells,MSCs)분화위심기양세포적정황급Nkx2.5、GATA-4 mRNA적표체,종이학정대서MSCs체외유도위심기양세포적조건、규률급전화세포적특점.방법:선용성년근교계Wistar대서,이용percoll분리액진행밀도제도리심법화직접첩벽법진행분리、제순MSCs,병진행배양확증.면역조화방법대제9대MSCs표면항원진행감정.분별응용10μmol/L5-담포감(5-azacytidine,5-aza)급250μg/L SalB연합5-aza(5-aza+SalB)대제9대적MSCs진행연합유도24h,우유도후제4주,용실시형광정량RT-PCR법검측GATA-4화Nkx2.5기인표체.결과:①제9대MSCs면역조화염색CIM4정양성표체,CD34정음성표체.②유도4주후,세포체적변소,가견유궤개세포련접형성적다핵기관양결구.5-az8조、5-aza+SalB조균출현명학적심기조기분화기인여5-aza조상비,5-828+SalB조적NKx2.5、GA-TA-4 mRNA표체명현증가.결론:SalB구유촉진5-aza유도적MSCs향심기양세포분화적작용,병차재Nkx2.5기인표체상단분산B적우세경가명현.