CAJ | 학술논문

肺癌患者血浆中APC基因启动子甲基化定量检测研究
폐암환자혈장중APC기인계동자갑기화정량검측연구
Methylation quantification of adenomatous polyposis coil(APC) gene promoter in plasma of lung cancer patients

万方数据

癌症癌癥 암증
CHINESE JOURNAL OF CANCER
2009年 4期 384-389 ,共6页

潘世扬%谢而付%束永前%高丽%张丽霞%陈丹%陈进步%赵文君%穆原%张寄南

반세양%사이부%속영전%고려%장려하%진단%진진보%조문군%목원%장기남

实时荧光定量MSP%肺肿瘤%血浆DNA%APC基因%DNA甲基化實時熒光定量MSP%肺腫瘤%血漿DNA%APC基因%DNA甲基化
실시형광정량MSP%폐종류%혈장DNA%APC기인%DNA갑기화

背景与目的:APC基因编码的蛋白参与信号转导途径,大量研究证实APC启动子区的高甲基化在肿瘤的发生发展中起重要作用.本研究建立血浆APC基因实时荧光定量甲基化特异性基因扩增(methylation-specific PCR,MSP)检测方法,并对临床肺癌患者血浆进行检测,以确定该方法在肺癌诊断中的应用价值.方法:将APC基因启动子甲基化阳性肺癌细胞株NCI-H460细胞用有限稀释法获取单个集落形成的细胞,以经典的酚-氯仿法提取细胞DNA.并用MSP对APC基因甲基化进行验证.紫外分光光度计定量并以10倍稀释的浓度梯度依次投入到200μL健康人血浆中,得到模拟肺癌患者血浆,利用磁珠核酸提取方法从模拟肺癌及肺癌患者、肺部良性疾病患者和健康对照者血浆中提取DNA,对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰;以模拟血浆样品作为标准品,采用外标准曲线法对各种血浆样品中APC甲基化进行定量分析.结果:所建立的实时荧光定量MSP检测方法的线性范围为1.5×102～1.5×105拷贝/mL,用该方法检测甲基化肿瘤细胞的DNA其最低检测限为1.5×102拷贝/mL.78例肺癌患者有40例组织中检测出APC基因甲基化阳性,其中的19例(47.5%)肺癌患者血浆中APC基因启动子甲基化阳性,APC甲基化浓度为1.67×102～6.78×103拷贝/mL,中位浓度为1.60×103拷贝/mL.38例组织阴性的肺癌患者、31例肺部良性疾病患者和23例健康者的血浆APC基因启动子甲基化均为阴性.结论:实时荧光定量MSP检测血浆APC基因甲基化在肺癌诊断方面具有潜在应用价值.
배경여목적:APC기인편마적단백삼여신호전도도경,대량연구증실APC계동자구적고갑기화재종류적발생발전중기중요작용.본연구건립혈장APC기인실시형광정량갑기화특이성기인확증(methylation-specific PCR,MSP)검측방법,병대림상폐암환자혈장진행검측,이학정해방법재폐암진단중적응용개치.방법:장APC기인계동자갑기화양성폐암세포주NCI-H460세포용유한희석법획취단개집락형성적세포,이경전적분-록방법제취세포DNA.병용MSP대APC기인갑기화진행험증.자외분광광도계정량병이10배희석적농도제도의차투입도200μL건강인혈장중,득도모의폐암환자혈장,이용자주핵산제취방법종모의폐암급폐암환자、폐부량성질병환자화건강대조자혈장중제취DNA,대혈장DNA모판진행아류산경염화학수식;이모의혈장양품작위표준품,채용외표준곡선법대각충혈장양품중APC갑기화진행정량분석.결과:소건립적실시형광정량MSP검측방법적선성범위위1.5×102～1.5×105고패/mL,용해방법검측갑기화종류세포적DNA기최저검측한위1.5×102고패/mL.78례폐암환자유40례조직중검측출APC기인갑기화양성,기중적19례(47.5%)폐암환자혈장중APC기인계동자갑기화양성,APC갑기화농도위1.67×102～6.78×103고패/mL,중위농도위1.60×103고패/mL.38례조직음성적폐암환자、31례폐부량성질병환자화23례건강자적혈장APC기인계동자갑기화균위음성.결론:실시형광정량MSP검측혈장APC기인갑기화재폐암진단방면구유잠재응용개치.