CAJ | 학술논문

尽管质粒和选择标记的使用作为基因工程最基本的一环而为人们所熟知,但对一些特殊菌种(菌株)或研究很少的菌种(菌株)的基因工程操作来说,质粒和选择标记可能仍然是一个并未完全解决的问题,因而需要不断提高认识、不断改进.运动发酵单胞菌Zymomonas mobilis具有突出的产醇性能,但其多种内源质粒和多种抗性的特点,增加了其基因工程操作时质粒和选择标记选用的难度.本研究在测定四个抗生素即Ap、Cm、Tc、Km对典型菌株ZM4、CP4的最低生长抑制浓度的基础上,初步确定了这两个菌株基因工程操作时的四个抗生素使用浓度依次分别为300、100、25、350μg/mL(ZM4)和500、100、25、250 μg/mL(CP4)；并进一步通过穿梭载体pZB21、宽宿主载体pBBR1MCS-2和整合载体pBR328-ldh R-cml - ldhL的转化,初步分析和证明了这些选择标记和在相应抗生素浓度下的效果:首先,对每一个选择标记基因来说,前述抗生素浓度是适于携带此选择标记基因的质粒的转化筛选和相应转化子培养的；其次,在前述抗生素浓度下,综合筛选平板阳性率和转化效率、培养物菌体形态异常程度等指标,四个选择标记基因中,以Cm和Tc抗性标记基因效果最好,Km抗性标记基因居中,Ap抗性标记基因最差.这些结果为ZM4、CP4基因工程遗传改造用抗性标记基因、质粒、抗生素的选择及转化系统的完善奠定了基础.
진관질립화선택표기적사용작위기인공정최기본적일배이위인문소숙지,단대일사특수균충(균주)혹연구흔소적균충(균주)적기인공정조작래설,질립화선택표기가능잉연시일개병미완전해결적문제,인이수요불단제고인식、불단개진.운동발효단포균Zymomonas mobilis구유돌출적산순성능,단기다충내원질립화다충항성적특점,증가료기기인공정조작시질립화선택표기선용적난도.본연구재측정사개항생소즉Ap、Cm、Tc、Km대전형균주ZM4、CP4적최저생장억제농도적기출상,초보학정료저량개균주기인공정조작시적사개항생소사용농도의차분별위300、100、25、350μg/mL(ZM4)화500、100、25、250 μg/mL(CP4)；병진일보통과천사재체pZB21、관숙주재체pBBR1MCS-2화정합재체pBR328-ldh R-cml - ldhL적전화,초보분석화증명료저사선택표기화재상응항생소농도하적효과:수선,대매일개선택표기기인래설,전술항생소농도시괄우휴대차선택표기기인적질립적전화사선화상응전화자배양적；기차,재전술항생소농도하,종합사선평판양성솔화전화효솔、배양물균체형태이상정도등지표,사개선택표기기인중,이Cm화Tc항성표기기인효과최호,Km항성표기기인거중,Ap항성표기기인최차.저사결과위ZM4、CP4기인공정유전개조용항성표기기인、질립、항생소적선택급전화계통적완선전정료기출.