国际检验医学杂志
國際檢驗醫學雜誌
국제검험의학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2012年
20期
2482-2485
,共4页
高德玉%刘阳%王凯%虞伟%严孝岭%陈芳芳%李晓军
高德玉%劉暘%王凱%虞偉%嚴孝嶺%陳芳芳%李曉軍
고덕옥%류양%왕개%우위%엄효령%진방방%리효군
关节炎,类风湿%抗环瓜氨酸化蛋白抗体%二维电泳%质谱分析法
關節炎,類風濕%抗環瓜氨痠化蛋白抗體%二維電泳%質譜分析法
관절염,류풍습%항배과안산화단백항체%이유전영%질보분석법
目的 血清抗环瓜氨酸化蛋白抗体(抗CCP抗体)检测对类风湿关节炎(RA)诊断具有高度的敏感性及特异性,是一种RA早期诊断指标.尽管抗体已被发现多年,但是其所针对的天然靶抗原仍不十分清楚.本试验通过合成兔抗CCP抗体免疫亲和层析柱,提取RA患者及健康人血清中瓜氨酸化相关抗原,并通过蛋白质组学技术对提取的具有差异性的瓜氨酸化蛋白进行鉴定.方法 抗CCP抗体阳性血清取自2010年12月至2011年7月本院门诊及住院RA患者,正常血清取自健康献血者及体检者.体外人工合成CCP肽(HQCHQESTXGRSRGRCGRSGS),制备并纯化兔抗CCP多克隆抗体.将纯化的兔抗CCP抗体与高流速NHs-活化琼脂糖偶联制作免疫亲和柱,提取RA患者抗CCP抗体阳性血清及正常血清中的瓜氨酸化蛋白质,通过二维电泳将提取蛋白分离,分析并筛选二者有差异蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行质谱分析进行蛋白鉴定.结果 通过兔抗CCP抗体-高流速NHs-活化琼脂糖免疫亲和层析纯化、二维电泳和基质辅助激光解吸电离飞行质谱分析,获得了差异性及重复性很好的差异蛋白图谱,将RA患者ACCP阳性血清和正常血清亲和层析提取蛋白2-D图谱比对发现,RA提取蛋白二维凝胶电泳图谱中共312蛋白点,正常血清提取蛋白有274个蛋白点,其中有166个具有差异表达的蛋白点.在差异蛋白点中,有101个蛋白点在RA患者血清提取蛋白中表达上调,65个蛋白点在RA患者血清提取蛋白中表达下调.52个蛋白点RA患者血清提取蛋白中表达而在正常血清提取蛋白缺失,16种蛋白在RA患者血清提取蛋白中表达而在正常血清提取蛋白缺失.挑选其中差异明显并且灰度值较高的的51个点进行鉴定分析,并与IPI和Swiss-Prot数据库进行比对,共鉴定出多种可能与RA发病相关的蛋白.在选取的51个蛋白点中,有30个蛋白点在RA患者血清提取蛋白中表达上调,21个蛋白点在RA患者血清提取蛋白中表达下调.结论 在RA患者与健康者血清蛋白中发现部分差异表达的瓜氨酸化蛋白,这些差异蛋白可能成为涉及RA发病机制的自身抗原,为进一步研究RA的发病机制奠定了基础.
目的 血清抗環瓜氨痠化蛋白抗體(抗CCP抗體)檢測對類風濕關節炎(RA)診斷具有高度的敏感性及特異性,是一種RA早期診斷指標.儘管抗體已被髮現多年,但是其所針對的天然靶抗原仍不十分清楚.本試驗通過閤成兔抗CCP抗體免疫親和層析柱,提取RA患者及健康人血清中瓜氨痠化相關抗原,併通過蛋白質組學技術對提取的具有差異性的瓜氨痠化蛋白進行鑒定.方法 抗CCP抗體暘性血清取自2010年12月至2011年7月本院門診及住院RA患者,正常血清取自健康獻血者及體檢者.體外人工閤成CCP肽(HQCHQESTXGRSRGRCGRSGS),製備併純化兔抗CCP多剋隆抗體.將純化的兔抗CCP抗體與高流速NHs-活化瓊脂糖偶聯製作免疫親和柱,提取RA患者抗CCP抗體暘性血清及正常血清中的瓜氨痠化蛋白質,通過二維電泳將提取蛋白分離,分析併篩選二者有差異蛋白質點,通過基質輔助激光解吸電離飛行質譜分析進行蛋白鑒定.結果 通過兔抗CCP抗體-高流速NHs-活化瓊脂糖免疫親和層析純化、二維電泳和基質輔助激光解吸電離飛行質譜分析,穫得瞭差異性及重複性很好的差異蛋白圖譜,將RA患者ACCP暘性血清和正常血清親和層析提取蛋白2-D圖譜比對髮現,RA提取蛋白二維凝膠電泳圖譜中共312蛋白點,正常血清提取蛋白有274箇蛋白點,其中有166箇具有差異錶達的蛋白點.在差異蛋白點中,有101箇蛋白點在RA患者血清提取蛋白中錶達上調,65箇蛋白點在RA患者血清提取蛋白中錶達下調.52箇蛋白點RA患者血清提取蛋白中錶達而在正常血清提取蛋白缺失,16種蛋白在RA患者血清提取蛋白中錶達而在正常血清提取蛋白缺失.挑選其中差異明顯併且灰度值較高的的51箇點進行鑒定分析,併與IPI和Swiss-Prot數據庫進行比對,共鑒定齣多種可能與RA髮病相關的蛋白.在選取的51箇蛋白點中,有30箇蛋白點在RA患者血清提取蛋白中錶達上調,21箇蛋白點在RA患者血清提取蛋白中錶達下調.結論 在RA患者與健康者血清蛋白中髮現部分差異錶達的瓜氨痠化蛋白,這些差異蛋白可能成為涉及RA髮病機製的自身抗原,為進一步研究RA的髮病機製奠定瞭基礎.
목적 혈청항배과안산화단백항체(항CCP항체)검측대류풍습관절염(RA)진단구유고도적민감성급특이성,시일충RA조기진단지표.진관항체이피발현다년,단시기소침대적천연파항원잉불십분청초.본시험통과합성토항CCP항체면역친화층석주,제취RA환자급건강인혈청중과안산화상관항원,병통과단백질조학기술대제취적구유차이성적과안산화단백진행감정.방법 항CCP항체양성혈청취자2010년12월지2011년7월본원문진급주원RA환자,정상혈청취자건강헌혈자급체검자.체외인공합성CCP태(HQCHQESTXGRSRGRCGRSGS),제비병순화토항CCP다극륭항체.장순화적토항CCP항체여고류속NHs-활화경지당우련제작면역친화주,제취RA환자항CCP항체양성혈청급정상혈청중적과안산화단백질,통과이유전영장제취단백분리,분석병사선이자유차이단백질점,통과기질보조격광해흡전리비행질보분석진행단백감정.결과 통과토항CCP항체-고류속NHs-활화경지당면역친화층석순화、이유전영화기질보조격광해흡전리비행질보분석,획득료차이성급중복성흔호적차이단백도보,장RA환자ACCP양성혈청화정상혈청친화층석제취단백2-D도보비대발현,RA제취단백이유응효전영도보중공312단백점,정상혈청제취단백유274개단백점,기중유166개구유차이표체적단백점.재차이단백점중,유101개단백점재RA환자혈청제취단백중표체상조,65개단백점재RA환자혈청제취단백중표체하조.52개단백점RA환자혈청제취단백중표체이재정상혈청제취단백결실,16충단백재RA환자혈청제취단백중표체이재정상혈청제취단백결실.도선기중차이명현병차회도치교고적적51개점진행감정분석,병여IPI화Swiss-Prot수거고진행비대,공감정출다충가능여RA발병상관적단백.재선취적51개단백점중,유30개단백점재RA환자혈청제취단백중표체상조,21개단백점재RA환자혈청제취단백중표체하조.결론 재RA환자여건강자혈청단백중발현부분차이표체적과안산화단백,저사차이단백가능성위섭급RA발병궤제적자신항원,위진일보연구RA적발병궤제전정료기출.
