CAJ | 학술논문

目的研究胞嘧啶脱氨酶APOBEC3G(A3G)对HBV复制的影响及作用机制.方法利用脂质体介导A3G和HBV的真核表达质粒瞬时共转染人肝癌细胞株HepG2,以空载体pcDNA3.1与HBV真核表达质粒共转染为对照,同时转染含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的质粒载体以判定转染效率.共转染两天后用荧光定量PCR方法定量细胞内核壳体(core)相关HBV DNA水平,用Western blot检测细胞内A3G和HBcAg的表达,并对细胞内core相关HBV DNA X基因进行PCR扩增、T-A克隆和测序,分析X基因中的碱基突变.结果经EGFP判定的转染效率平均为29%.共转染0.5 μg A3G和0.5 μg HBV的HepG2细胞内core相关HBV DNA量平均下降为对照的8.9%,共转染2μg A3G和0.5 μg HBV的平均下降为对照的0.6%.共转染A3G和HBV表达质粒后,HepG2细胞内HBV的X基因中发生G→A突变的数目明显增多,33个克隆中有9个克隆检测到了16～37个G→A突变,突变总数达254个,而对照的33个克隆中仅有2个克隆各检测到2个G→A突变.进一步的分析发现,共转染A3G后发生的G→A突变大多集中于几个热点区域,突变靶点常在GG二核苷酸中的第一个G上.结论胞嘧啶脱氨酶APOBEC3G可能通过诱导HBV DNA的X基因发生G→A超突变,抑制HBV在人肝癌细胞HepG2中的复制.
목적 연구포밀정탈안매APOBEC3G(A3G)대HBV복제적영향급작용궤제.방법 이용지질체개도A3G화HBV적진핵표체질립순시공전염인간암세포주HepG2,이공재체pcDNA3.1여HBV진핵표체질립공전염위대조,동시전염함증강형록색형광단백(EGFP)기인적질립재체이판정전염효솔.공전염량천후용형광정량PCR방법정량세포내핵각체(core)상관HBV DNA수평,용Western blot검측세포내A3G화HBcAg적표체,병대세포내core상관HBV DNA X기인진행PCR확증、T-A극륭화측서,분석X기인중적감기돌변.결과 경EGFP판정적전염효솔평균위29%.공전염0.5 μg A3G화0.5 μg HBV적HepG2세포내core상관HBV DNA량평균하강위대조적8.9%,공전염2μg A3G화0.5 μg HBV적평균하강위대조적0.6%.공전염A3G화HBV표체질립후,HepG2세포내HBV적X기인중발생G→A돌변적수목명현증다,33개극륭중유9개극륭검측도료16～37개G→A돌변,돌변총수체254개,이대조적33개극륭중부유2개극륭각검측도2개G→A돌변.진일보적분석발현,공전염A3G후발생적G→A돌변대다집중우궤개열점구역,돌변파점상재GG이핵감산중적제일개G상.결론 포밀정탈안매APOBEC3G가능통과유도HBV DNA적X기인발생G→A초돌변,억제HBV재인간암세포HepG2중적복제.