生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
4期
558-562
,共5页
吴琛%单耀军%邹民吉%王嘉玺%徐东刚
吳琛%單耀軍%鄒民吉%王嘉璽%徐東剛
오침%단요군%추민길%왕가새%서동강
胰岛素样生长因子结合蛋白3%真核分泌表达%人肾癌细胞%诱导凋亡
胰島素樣生長因子結閤蛋白3%真覈分泌錶達%人腎癌細胞%誘導凋亡
이도소양생장인자결합단백3%진핵분비표체%인신암세포%유도조망
将人胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)的cDNA片段亚克隆入pSectagA载体,构建真核分泌型表达载体pSectag-IGFBP3.采用脂质体转染的方法将真核表达载体转染人肾癌786-O细胞,转染48 h后用免疫印迹法检测IGFBP-3的表达状况;同时以Annexin V-EGFP/PI染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率,观察分泌表达的IGFBP-3对宿主细胞的促凋亡作用.转染48 h后,经Western blotting检测,在细胞培养上清中有分泌表达的IGFBP-3蛋白.流式细胞技术检测结果表明,表达产物可直接作用于宿主细胞,发挥促肿瘤细胞凋亡的作用.由此表明所构建的重组表达质粒pSectag-IGFBP3能在真核细胞水平正常表达并发挥生物学功能,为进一步探索IGFBP-3的作用机制奠定了基础.
將人胰島素樣生長因子結閤蛋白3(IGFBP-3)的cDNA片段亞剋隆入pSectagA載體,構建真覈分泌型錶達載體pSectag-IGFBP3.採用脂質體轉染的方法將真覈錶達載體轉染人腎癌786-O細胞,轉染48 h後用免疫印跡法檢測IGFBP-3的錶達狀況;同時以Annexin V-EGFP/PI染色,流式細胞儀檢測細胞凋亡率,觀察分泌錶達的IGFBP-3對宿主細胞的促凋亡作用.轉染48 h後,經Western blotting檢測,在細胞培養上清中有分泌錶達的IGFBP-3蛋白.流式細胞技術檢測結果錶明,錶達產物可直接作用于宿主細胞,髮揮促腫瘤細胞凋亡的作用.由此錶明所構建的重組錶達質粒pSectag-IGFBP3能在真覈細胞水平正常錶達併髮揮生物學功能,為進一步探索IGFBP-3的作用機製奠定瞭基礎.
장인이도소양생장인자결합단백3(IGFBP-3)적cDNA편단아극륭입pSectagA재체,구건진핵분비형표체재체pSectag-IGFBP3.채용지질체전염적방법장진핵표체재체전염인신암786-O세포,전염48 h후용면역인적법검측IGFBP-3적표체상황;동시이Annexin V-EGFP/PI염색,류식세포의검측세포조망솔,관찰분비표체적IGFBP-3대숙주세포적촉조망작용.전염48 h후,경Western blotting검측,재세포배양상청중유분비표체적IGFBP-3단백.류식세포기술검측결과표명,표체산물가직접작용우숙주세포,발휘촉종류세포조망적작용.유차표명소구건적중조표체질립pSectag-IGFBP3능재진핵세포수평정상표체병발휘생물학공능,위진일보탐색IGFBP-3적작용궤제전정료기출.
