目的:采用胚胎舌体外培养结合扫描电子显微镜、免疫组织化学方法,探讨骨形成蛋白(bone morphogenetie protein-4,BMP4)对舌体形态发育的影响.方法:分别向标准培养基中添加不同浓度的BMP4及其拮抗剂Noggin,以所加因子及其浓度的不同分为6个实验组,BMP4分为3组,浓度分别为0.03 mg/L,0.3 mg/L,1 mg/L;BMP4的拮抗剂Noggin分为3组,浓度分别为1 mg/L,3 mg/L,10 mg/L;标准培养基培养组为对照组.将解剖获得的大鼠胚胎第13天(embryonic day 13,E13)的胚胎舌在培养基中格栅法培养3 d,固定后,用扫描电子显微镜观察记录胚胎舌;分别测量胚胎舌全长、舌前1/8、舌前1/4和舌体1/2宽度,统计分析测量结果.胚胎舌内放置经PBS和BMP4(667 mg/L)溶液处理的凝胶颗粒,以PBS组为对照组,在标准培养基中培养3 d后,制成冰冻切片,检测Ki67的表达.结果:(1)舌形态:舌体长度明显改变(P＜0.05),相对对照组舌体长度(1 037.8±126.2 μm),BMP4各浓度组舌体长度明显变短(0.03 mg/L组877.3±67.6 μm,0.3 mg/L组838.5±88.9 μm,1 mg/L组718.7±38.6 μm),Noggin各浓度组变化不明显(1 mg/L组1 191.1±75 7 μm,3 mg/L组1 169.8±108.7 μm,10mg/L组1 241.3±17.4 μm);舌前1/8宽度明显改变(P＜0.05),相对对照组(639.1±106.2 μm),BMP4各浓度组舌前1/8宽度明显变窄(0.03 mg/L组332.1±80.9 μm,0.3 mg/L组305.1±51.3 μm,1 mg/L组276.9±45.9μm),Noggin各浓度组除10 mg/L组外,舌前1/8宽度加宽(1 mg/L组815.5±90.3 μm,3 mg/L组857.6±87.1μm,10 mg/L组807.1±113.8 μm);舌前1/4宽度改变明显(P＜0.05),相对对照组(653.7±101.6 μm),BMP4各浓度组舌前1/4宽度明显变窄(0.03 mg/L组421.3±43.8 μm,0.3 mg/L组407.3±15.6 μm,1 mg/L组363.7±24.7 μm),而Noggin各浓度组明显加宽(1 mg/L组838.0±130.5 μm,3 mg/L组947.2±34.9 μm,10mg/L组889.4±74.6 μm);舌体1/2宽度变化明显(P＜0.05),相对对照组(683.1±79.8 μm),BMP4各浓度组舌体1/2宽度明显变窄(0.03 mg/L组567.3±35.8 μm,0.3 mg/L组548.4±30.5 μm,1 mg/L组457.4±48.0μm),Noggin各浓度组舌体1/2有增宽趋势,与其他两组比较,3 mg/L组差异有统计学意义(1 mg/L组776.2±134.1 μm,3 mg/L组964.3±44.3 μm,10 mg/L组777.2±46.7 μm).(2)BMP4凝胶颗粒周围Ki67阳性细胞数量少于对照组.结论:(1)BMP4可影响E13胚胎舌形态发育,使舌体呈现短、窄、尖的外形;(2)BMP4抑制胚胎舌的细胞增殖.
目的:採用胚胎舌體外培養結閤掃描電子顯微鏡、免疫組織化學方法,探討骨形成蛋白(bone morphogenetie protein-4,BMP4)對舌體形態髮育的影響.方法:分彆嚮標準培養基中添加不同濃度的BMP4及其拮抗劑Noggin,以所加因子及其濃度的不同分為6箇實驗組,BMP4分為3組,濃度分彆為0.03 mg/L,0.3 mg/L,1 mg/L;BMP4的拮抗劑Noggin分為3組,濃度分彆為1 mg/L,3 mg/L,10 mg/L;標準培養基培養組為對照組.將解剖穫得的大鼠胚胎第13天(embryonic day 13,E13)的胚胎舌在培養基中格柵法培養3 d,固定後,用掃描電子顯微鏡觀察記錄胚胎舌;分彆測量胚胎舌全長、舌前1/8、舌前1/4和舌體1/2寬度,統計分析測量結果.胚胎舌內放置經PBS和BMP4(667 mg/L)溶液處理的凝膠顆粒,以PBS組為對照組,在標準培養基中培養3 d後,製成冰凍切片,檢測Ki67的錶達.結果:(1)舌形態:舌體長度明顯改變(P＜0.05),相對對照組舌體長度(1 037.8±126.2 μm),BMP4各濃度組舌體長度明顯變短(0.03 mg/L組877.3±67.6 μm,0.3 mg/L組838.5±88.9 μm,1 mg/L組718.7±38.6 μm),Noggin各濃度組變化不明顯(1 mg/L組1 191.1±75 7 μm,3 mg/L組1 169.8±108.7 μm,10mg/L組1 241.3±17.4 μm);舌前1/8寬度明顯改變(P＜0.05),相對對照組(639.1±106.2 μm),BMP4各濃度組舌前1/8寬度明顯變窄(0.03 mg/L組332.1±80.9 μm,0.3 mg/L組305.1±51.3 μm,1 mg/L組276.9±45.9μm),Noggin各濃度組除10 mg/L組外,舌前1/8寬度加寬(1 mg/L組815.5±90.3 μm,3 mg/L組857.6±87.1μm,10 mg/L組807.1±113.8 μm);舌前1/4寬度改變明顯(P＜0.05),相對對照組(653.7±101.6 μm),BMP4各濃度組舌前1/4寬度明顯變窄(0.03 mg/L組421.3±43.8 μm,0.3 mg/L組407.3±15.6 μm,1 mg/L組363.7±24.7 μm),而Noggin各濃度組明顯加寬(1 mg/L組838.0±130.5 μm,3 mg/L組947.2±34.9 μm,10mg/L組889.4±74.6 μm);舌體1/2寬度變化明顯(P＜0.05),相對對照組(683.1±79.8 μm),BMP4各濃度組舌體1/2寬度明顯變窄(0.03 mg/L組567.3±35.8 μm,0.3 mg/L組548.4±30.5 μm,1 mg/L組457.4±48.0μm),Noggin各濃度組舌體1/2有增寬趨勢,與其他兩組比較,3 mg/L組差異有統計學意義(1 mg/L組776.2±134.1 μm,3 mg/L組964.3±44.3 μm,10 mg/L組777.2±46.7 μm).(2)BMP4凝膠顆粒週圍Ki67暘性細胞數量少于對照組.結論:(1)BMP4可影響E13胚胎舌形態髮育,使舌體呈現短、窄、尖的外形;(2)BMP4抑製胚胎舌的細胞增殖.
목적:채용배태설체외배양결합소묘전자현미경、면역조직화학방법,탐토골형성단백(bone morphogenetie protein-4,BMP4)대설체형태발육적영향.방법:분별향표준배양기중첨가불동농도적BMP4급기길항제Noggin,이소가인자급기농도적불동분위6개실험조,BMP4분위3조,농도분별위0.03 mg/L,0.3 mg/L,1 mg/L;BMP4적길항제Noggin분위3조,농도분별위1 mg/L,3 mg/L,10 mg/L;표준배양기배양조위대조조.장해부획득적대서배태제13천(embryonic day 13,E13)적배태설재배양기중격책법배양3 d,고정후,용소묘전자현미경관찰기록배태설;분별측량배태설전장、설전1/8、설전1/4화설체1/2관도,통계분석측량결과.배태설내방치경PBS화BMP4(667 mg/L)용액처리적응효과립,이PBS조위대조조,재표준배양기중배양3 d후,제성빙동절편,검측Ki67적표체.결과:(1)설형태:설체장도명현개변(P＜0.05),상대대조조설체장도(1 037.8±126.2 μm),BMP4각농도조설체장도명현변단(0.03 mg/L조877.3±67.6 μm,0.3 mg/L조838.5±88.9 μm,1 mg/L조718.7±38.6 μm),Noggin각농도조변화불명현(1 mg/L조1 191.1±75 7 μm,3 mg/L조1 169.8±108.7 μm,10mg/L조1 241.3±17.4 μm);설전1/8관도명현개변(P＜0.05),상대대조조(639.1±106.2 μm),BMP4각농도조설전1/8관도명현변착(0.03 mg/L조332.1±80.9 μm,0.3 mg/L조305.1±51.3 μm,1 mg/L조276.9±45.9μm),Noggin각농도조제10 mg/L조외,설전1/8관도가관(1 mg/L조815.5±90.3 μm,3 mg/L조857.6±87.1μm,10 mg/L조807.1±113.8 μm);설전1/4관도개변명현(P＜0.05),상대대조조(653.7±101.6 μm),BMP4각농도조설전1/4관도명현변착(0.03 mg/L조421.3±43.8 μm,0.3 mg/L조407.3±15.6 μm,1 mg/L조363.7±24.7 μm),이Noggin각농도조명현가관(1 mg/L조838.0±130.5 μm,3 mg/L조947.2±34.9 μm,10mg/L조889.4±74.6 μm);설체1/2관도변화명현(P＜0.05),상대대조조(683.1±79.8 μm),BMP4각농도조설체1/2관도명현변착(0.03 mg/L조567.3±35.8 μm,0.3 mg/L조548.4±30.5 μm,1 mg/L조457.4±48.0μm),Noggin각농도조설체1/2유증관추세,여기타량조비교,3 mg/L조차이유통계학의의(1 mg/L조776.2±134.1 μm,3 mg/L조964.3±44.3 μm,10 mg/L조777.2±46.7 μm).(2)BMP4응효과립주위Ki67양성세포수량소우대조조.결론:(1)BMP4가영향E13배태설형태발육,사설체정현단、착、첨적외형;(2)BMP4억제배태설적세포증식.
