CAJ | 학술논문

目的:构建hsa-miR-223真核表达载体,并在人食管癌细胞KYSE-150中验证hsa-miR-223对靶基因artemin(ARTN)的调控作用.方法:以基因组DNA为模板,RT-PCR扩增包括hsa-miR-223前体序列在内的基因序列,并将其克隆到载体pCD?NA3.1(+)上,通过实时定量PCR方法检测hsa-miR-223在人胚肾HEK293细胞中的表达.根据生物信息学预测软件TargetScan、mirBase和PicTar对hsa-miR-223靶基因进行预测,将靶基因ARTN的3'UTR区融合到pMIR荧光素酶基因下游,通过双荧光素酶报告基因检测hsa-miR-223 对靶基因ARTN 的3'UTR 区的调控作用.将pCDNA3.1-miR-223 表达质粒转染人食管癌细胞KYSE150,通过Western blot检测对ARTN蛋白表达的影响.结果:成功构建hsa-miR-223表达载体pCDNA3.1-miR-223.实时定量PCR 验证表明pCDNA3.1-miR-223 在人胚肾HEK293 中能够明显地过表达成熟miR-223.生物信息学预测ARTN 是hsa-miR-223的靶基因,并构建融合ARTN的3'UTR区表达质粒pMIR-ARTN,在此基础上对ARTN的3'UTR"种子区"进行定点突变.双荧光素酶报告基因分析表明hsa-miR-223能够作用于ARTN的3'UTR.Western blot法进一步证实ARTN是miR-223的靶基因.结论:hsa-miR-223作用于ARTN的3'UTR可在转录后水平上调控ARTN蛋白的表达.
목적:구건hsa-miR-223진핵표체재체,병재인식관암세포KYSE-150중험증hsa-miR-223대파기인artemin(ARTN)적조공작용.방법:이기인조DNA위모판,RT-PCR확증포괄hsa-miR-223전체서렬재내적기인서렬,병장기극륭도재체pCD?NA3.1(+)상,통과실시정량PCR방법검측hsa-miR-223재인배신HEK293세포중적표체.근거생물신식학예측연건TargetScan、mirBase화PicTar대hsa-miR-223파기인진행예측,장파기인ARTN적3'UTR구융합도pMIR형광소매기인하유,통과쌍형광소매보고기인검측hsa-miR-223 대파기인ARTN 적3'UTR 구적조공작용.장pCDNA3.1-miR-223 표체질립전염인식관암세포KYSE150,통과Western blot검측대ARTN단백표체적영향.결과:성공구건hsa-miR-223표체재체pCDNA3.1-miR-223.실시정량PCR 험증표명pCDNA3.1-miR-223 재인배신HEK293 중능구명현지과표체성숙miR-223.생물신식학예측ARTN 시hsa-miR-223적파기인,병구건융합ARTN적3'UTR구표체질립pMIR-ARTN,재차기출상대ARTN적3'UTR"충자구"진행정점돌변.쌍형광소매보고기인분석표명hsa-miR-223능구작용우ARTN적3'UTR.Western blot법진일보증실ARTN시miR-223적파기인.결론:hsa-miR-223작용우ARTN적3'UTR가재전록후수평상조공ARTN단백적표체.