浙江工业大学学报
浙江工業大學學報
절강공업대학학보
Journal of Zhejiang University of Technology
2011年
3期
252-256,260
,共6页
洪敏%赵春田%张正波%吴瑶瑶%裘娟萍%白彦兵
洪敏%趙春田%張正波%吳瑤瑤%裘娟萍%白彥兵
홍민%조춘전%장정파%오요요%구연평%백언병
L-天冬氨酸α-脱羧酶%PanD%工程菌%诱导表达%培养条件
L-天鼕氨痠α-脫羧酶%PanD%工程菌%誘導錶達%培養條件
L-천동안산α-탈최매%PanD%공정균%유도표체%배양조건
L-天冬氨酸α-脱羧酶以L-天冬氨酸为底物,脱去α-羧基后生成β-丙氨酸.利用PCR扩增技术,将Escherichia coli DH5α中的PanD基因克隆后连接到pET28c(+)载体上,先转化E.coli DH5α中,经过50 μg/mL卡那霉素抗性筛选和酶切、测序验证后,转化表达菌株E.coli BL21(DE3),得到具有L-天冬氨酸α-脱羧酶活性的工程菌株E.coli BL21(DE3)/pET28c(+)-panD.经乳糖诱导该基因能有效表达C-末端具有组氨酸标签的L-天冬氨酸α-脱羧酶.通过对乳糖诱导时间、乳糖诱导质量浓度、诱导温度、诱导菌龄和培养基诱导初始pH值等发酵条件的优化,得到最佳培养条件为:乳糖诱导时间20 h,乳糖质量浓度12 g/L,诱导温度为35℃,诱导菌龄为3.5 h,诱导培养基初始pH 5.5,通过对转化产物β-丙氨酸的检测结果分析显示,工程菌株E.coli BL21(DE3)/pET28c(+)-panD在优化条件下,酶活力达186 U.
L-天鼕氨痠α-脫羧酶以L-天鼕氨痠為底物,脫去α-羧基後生成β-丙氨痠.利用PCR擴增技術,將Escherichia coli DH5α中的PanD基因剋隆後連接到pET28c(+)載體上,先轉化E.coli DH5α中,經過50 μg/mL卡那黴素抗性篩選和酶切、測序驗證後,轉化錶達菌株E.coli BL21(DE3),得到具有L-天鼕氨痠α-脫羧酶活性的工程菌株E.coli BL21(DE3)/pET28c(+)-panD.經乳糖誘導該基因能有效錶達C-末耑具有組氨痠標籤的L-天鼕氨痠α-脫羧酶.通過對乳糖誘導時間、乳糖誘導質量濃度、誘導溫度、誘導菌齡和培養基誘導初始pH值等髮酵條件的優化,得到最佳培養條件為:乳糖誘導時間20 h,乳糖質量濃度12 g/L,誘導溫度為35℃,誘導菌齡為3.5 h,誘導培養基初始pH 5.5,通過對轉化產物β-丙氨痠的檢測結果分析顯示,工程菌株E.coli BL21(DE3)/pET28c(+)-panD在優化條件下,酶活力達186 U.
L-천동안산α-탈최매이L-천동안산위저물,탈거α-최기후생성β-병안산.이용PCR확증기술,장Escherichia coli DH5α중적PanD기인극륭후련접도pET28c(+)재체상,선전화E.coli DH5α중,경과50 μg/mL잡나매소항성사선화매절、측서험증후,전화표체균주E.coli BL21(DE3),득도구유L-천동안산α-탈최매활성적공정균주E.coli BL21(DE3)/pET28c(+)-panD.경유당유도해기인능유효표체C-말단구유조안산표첨적L-천동안산α-탈최매.통과대유당유도시간、유당유도질량농도、유도온도、유도균령화배양기유도초시pH치등발효조건적우화,득도최가배양조건위:유당유도시간20 h,유당질량농도12 g/L,유도온도위35℃,유도균령위3.5 h,유도배양기초시pH 5.5,통과대전화산물β-병안산적검측결과분석현시,공정균주E.coli BL21(DE3)/pET28c(+)-panD재우화조건하,매활력체186 U.
