中国农学通报
中國農學通報
중국농학통보
CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN
2011年
27期
239-244
,共6页
李若霖%崔百明%王颖%张秀春%陈雄庭%吴坤鑫
李若霖%崔百明%王穎%張秀春%陳雄庭%吳坤鑫
리약림%최백명%왕영%장수춘%진웅정%오곤흠
橡胶草%DNA提取%RAPD%反应体系
橡膠草%DNA提取%RAPD%反應體繫
상효초%DNA제취%RAPD%반응체계
为探索适合橡胶草基因组DNA的提取方法和RAPD反应体系.采用改良CTAB法提取橡胶草叶片总DNA,得到的DNA能满足RAPD分析需要.通过单因子实验法分析DNA浓度、引物浓度、dNTPs浓度、Taq聚合酶以及Mg2+浓度对RAPD扩增结果的影响,建立了适合于橡胶草RAPD分子标记的最佳反应体系,即20 μL体系中包括:模板DNA 30 ng、Taq DNA聚合酶1.75 U、dNTPs浓度0.25 mmol/L、Mg2+浓度2.0 mmol/L、引物浓度0.5 μmol/L、10×PCR Buffer 2.0 μL.RAPD扩增反应程序为:94℃预变性5 min,94℃30 s,37℃30 s,72℃ 70 s,45个循环,最后72℃延伸7min.该反应体系具有较好的稳定性及可重复性.
為探索適閤橡膠草基因組DNA的提取方法和RAPD反應體繫.採用改良CTAB法提取橡膠草葉片總DNA,得到的DNA能滿足RAPD分析需要.通過單因子實驗法分析DNA濃度、引物濃度、dNTPs濃度、Taq聚閤酶以及Mg2+濃度對RAPD擴增結果的影響,建立瞭適閤于橡膠草RAPD分子標記的最佳反應體繫,即20 μL體繫中包括:模闆DNA 30 ng、Taq DNA聚閤酶1.75 U、dNTPs濃度0.25 mmol/L、Mg2+濃度2.0 mmol/L、引物濃度0.5 μmol/L、10×PCR Buffer 2.0 μL.RAPD擴增反應程序為:94℃預變性5 min,94℃30 s,37℃30 s,72℃ 70 s,45箇循環,最後72℃延伸7min.該反應體繫具有較好的穩定性及可重複性.
위탐색괄합상효초기인조DNA적제취방법화RAPD반응체계.채용개량CTAB법제취상효초협편총DNA,득도적DNA능만족RAPD분석수요.통과단인자실험법분석DNA농도、인물농도、dNTPs농도、Taq취합매이급Mg2+농도대RAPD확증결과적영향,건립료괄합우상효초RAPD분자표기적최가반응체계,즉20 μL체계중포괄:모판DNA 30 ng、Taq DNA취합매1.75 U、dNTPs농도0.25 mmol/L、Mg2+농도2.0 mmol/L、인물농도0.5 μmol/L、10×PCR Buffer 2.0 μL.RAPD확증반응정서위:94℃예변성5 min,94℃30 s,37℃30 s,72℃ 70 s,45개순배,최후72℃연신7min.해반응체계구유교호적은정성급가중복성.
