甘肃医药
甘肅醫藥
감숙의약
Gansu Medical Journal
2011年
6期
321-325
,共5页
陈伟民%王飞%彭鑫%蔡绮君%胡颖%关艺青
陳偉民%王飛%彭鑫%蔡綺君%鬍穎%關藝青
진위민%왕비%팽흠%채기군%호영%관예청
TPO%哺乳动物表达系统%COH/dhfr-%pCDNA3.1-TPO-His%pSV2-dhfr%GIEMSA%UT-7/EPO-Mpl
TPO%哺乳動物錶達繫統%COH/dhfr-%pCDNA3.1-TPO-His%pSV2-dhfr%GIEMSA%UT-7/EPO-Mpl
TPO%포유동물표체계통%COH/dhfr-%pCDNA3.1-TPO-His%pSV2-dhfr%GIEMSA%UT-7/EPO-Mpl
目的:研究获得高效表达重组蛋白TPO-His的哺乳动物表达系统稳定细胞株.方法:采用overlap PCR拼接得到带有TPO信号肽的TPO N-端功能区序列；构建重组表达载体pCDNA3.1-TPO-His.然后将其与pSV2-dhfr载体磷酸钙法共转哺乳动物表达系统细胞系COH/dhfr-,经过G418、MTX及条件培养基多重压力筛选得到高效表达重组蛋白TPO-His的稳定细胞株；通过采用GIEMSA法检测TPO刺激UT-7/EPO-Mpl细胞的分化作用来测试重组蛋白TPO-His的生物活性.结果:经过多重压力筛选获得高效稳定分泌表达目的蛋白的细胞株CHO(dhfr-)/pCDNA3.1-TPO-His,其表达量可达2.8μg/106cells/24h,纯化蛋白具有较高的生物活性.结论:研究获得具有高效分泌表达目的蛋白的稳定细胞株,其表达产物TPO-His具有较高的生物学活性.
目的:研究穫得高效錶達重組蛋白TPO-His的哺乳動物錶達繫統穩定細胞株.方法:採用overlap PCR拼接得到帶有TPO信號肽的TPO N-耑功能區序列；構建重組錶達載體pCDNA3.1-TPO-His.然後將其與pSV2-dhfr載體燐痠鈣法共轉哺乳動物錶達繫統細胞繫COH/dhfr-,經過G418、MTX及條件培養基多重壓力篩選得到高效錶達重組蛋白TPO-His的穩定細胞株；通過採用GIEMSA法檢測TPO刺激UT-7/EPO-Mpl細胞的分化作用來測試重組蛋白TPO-His的生物活性.結果:經過多重壓力篩選穫得高效穩定分泌錶達目的蛋白的細胞株CHO(dhfr-)/pCDNA3.1-TPO-His,其錶達量可達2.8μg/106cells/24h,純化蛋白具有較高的生物活性.結論:研究穫得具有高效分泌錶達目的蛋白的穩定細胞株,其錶達產物TPO-His具有較高的生物學活性.
목적:연구획득고효표체중조단백TPO-His적포유동물표체계통은정세포주.방법:채용overlap PCR병접득도대유TPO신호태적TPO N-단공능구서렬；구건중조표체재체pCDNA3.1-TPO-His.연후장기여pSV2-dhfr재체린산개법공전포유동물표체계통세포계COH/dhfr-,경과G418、MTX급조건배양기다중압력사선득도고효표체중조단백TPO-His적은정세포주；통과채용GIEMSA법검측TPO자격UT-7/EPO-Mpl세포적분화작용래측시중조단백TPO-His적생물활성.결과:경과다중압력사선획득고효은정분비표체목적단백적세포주CHO(dhfr-)/pCDNA3.1-TPO-His,기표체량가체2.8μg/106cells/24h,순화단백구유교고적생물활성.결론:연구획득구유고효분비표체목적단백적은정세포주,기표체산물TPO-His구유교고적생물학활성.
