中华医学遗传学杂志
中華醫學遺傳學雜誌
중화의학유전학잡지
CHINESE JOURNAL OF MEDICAL GENETICS
2000年
4期
281-284
,共4页
单细胞凝胶电泳%精子%脱氧核糖核酸损伤%过氧化氢
單細胞凝膠電泳%精子%脫氧覈糖覈痠損傷%過氧化氫
단세포응효전영%정자%탈양핵당핵산손상%과양화경
目的 引进精子单细胞凝胶电泳(single-cell gel electropherosis,SCGE)实验方法,用以检测人类精子DNA链断裂.方法 载有精子和凝胶的玻片首先在pH10的弱碱性裂解液中作用1 h,精子核分别用10 mmol/L二硫苏糖醇处理1 h,10 μg/ml RNA酶处理4 h,200μg/ml蛋白酶K处理15 h.精子核用15μg/ml的EB染色5 min.计数彗星细胞百分率,并用本试验室建立的精子SCGE实验方法观察H2O2在体外条件下对正常精子细胞DNA的损伤作用.结果 8名受试彗星精子细胞百分率为2%～38%,不同个体之间有明显差异.精子细胞在1.0 mmol/L H2O2的PBS中孵育0.5～4 h,彗星细胞百分率显著增加,并有明显的时间-效应趋势.精子细胞在0.125～1.000 mmol/L H2O2的PBS中孵育1 h,彗星细胞百分率显著增加,并有明显的剂量-效应关系.结论 SCGE可用于检测人类精子细胞DNA链断裂,使用这一实验方法成功地检测出H2O2引起的人类精子DNA损伤.
目的 引進精子單細胞凝膠電泳(single-cell gel electropherosis,SCGE)實驗方法,用以檢測人類精子DNA鏈斷裂.方法 載有精子和凝膠的玻片首先在pH10的弱堿性裂解液中作用1 h,精子覈分彆用10 mmol/L二硫囌糖醇處理1 h,10 μg/ml RNA酶處理4 h,200μg/ml蛋白酶K處理15 h.精子覈用15μg/ml的EB染色5 min.計數彗星細胞百分率,併用本試驗室建立的精子SCGE實驗方法觀察H2O2在體外條件下對正常精子細胞DNA的損傷作用.結果 8名受試彗星精子細胞百分率為2%～38%,不同箇體之間有明顯差異.精子細胞在1.0 mmol/L H2O2的PBS中孵育0.5～4 h,彗星細胞百分率顯著增加,併有明顯的時間-效應趨勢.精子細胞在0.125～1.000 mmol/L H2O2的PBS中孵育1 h,彗星細胞百分率顯著增加,併有明顯的劑量-效應關繫.結論 SCGE可用于檢測人類精子細胞DNA鏈斷裂,使用這一實驗方法成功地檢測齣H2O2引起的人類精子DNA損傷.
목적 인진정자단세포응효전영(single-cell gel electropherosis,SCGE)실험방법,용이검측인류정자DNA련단렬.방법 재유정자화응효적파편수선재pH10적약감성렬해액중작용1 h,정자핵분별용10 mmol/L이류소당순처리1 h,10 μg/ml RNA매처리4 h,200μg/ml단백매K처리15 h.정자핵용15μg/ml적EB염색5 min.계수혜성세포백분솔,병용본시험실건립적정자SCGE실험방법관찰H2O2재체외조건하대정상정자세포DNA적손상작용.결과 8명수시혜성정자세포백분솔위2%～38%,불동개체지간유명현차이.정자세포재1.0 mmol/L H2O2적PBS중부육0.5～4 h,혜성세포백분솔현저증가,병유명현적시간-효응추세.정자세포재0.125～1.000 mmol/L H2O2적PBS중부육1 h,혜성세포백분솔현저증가,병유명현적제량-효응관계.결론 SCGE가용우검측인류정자세포DNA련단렬,사용저일실험방법성공지검측출H2O2인기적인류정자DNA손상.
