生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2006年
1期
39-45
,共7页
梅岭%周锐%卢海松%贝为成%刘维红%林荔雯%洪文洲%陈焕春
梅嶺%週銳%盧海鬆%貝為成%劉維紅%林荔雯%洪文洲%陳煥春
매령%주예%로해송%패위성%류유홍%림려문%홍문주%진환춘
猪胸膜肺炎放线杆菌%ApxI毒素%N-端多肽%原核表达%免疫原性
豬胸膜肺炎放線桿菌%ApxI毒素%N-耑多肽%原覈錶達%免疫原性
저흉막폐염방선간균%ApxI독소%N-단다태%원핵표체%면역원성
ApxI外毒素是猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)最重要的毒力因子,为了研究其N端多肽的免疫原性,分别将apxIA基因的全长编码区(apxIA,3146bp)及其5'端1140bp的片段(apxIA5)克隆到原核表达载体pET-28a,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达,表达产物ApxIA和ApxIAN均以包涵体的形式存在,Westem-blot检测证实两种表达产物均具有免疫反应性.将纯化的重组蛋白(rApxIA和rApxIAN)和提取的天然毒素ApxI(nApxI)分别经腹腔免疫BALB/c小鼠,于免疫前、免疫2周和4周后分别检测了ELISA抗体和毒素中和抗体水平,结果表明,rApxIAN免疫组的ELISA抗体显著低于rApxIA免疫组和nApxI免疫组,但rApxIAN免疫组血清中和试验中测定的溶血素单位与rApxIA及天然nApxI免疫组没有显著差异.第二次免疫2周后,用1个LD50的APP血清1型J101株和2型标准菌株攻击试验动物,rApxIAN免疫组对血清1型和2型菌株的保护率分别为80%和100%.
ApxI外毒素是豬胸膜肺炎放線桿菌(APP)最重要的毒力因子,為瞭研究其N耑多肽的免疫原性,分彆將apxIA基因的全長編碼區(apxIA,3146bp)及其5'耑1140bp的片段(apxIA5)剋隆到原覈錶達載體pET-28a,經IPTG誘導後在大腸桿菌中實現瞭錶達,錶達產物ApxIA和ApxIAN均以包涵體的形式存在,Westem-blot檢測證實兩種錶達產物均具有免疫反應性.將純化的重組蛋白(rApxIA和rApxIAN)和提取的天然毒素ApxI(nApxI)分彆經腹腔免疫BALB/c小鼠,于免疫前、免疫2週和4週後分彆檢測瞭ELISA抗體和毒素中和抗體水平,結果錶明,rApxIAN免疫組的ELISA抗體顯著低于rApxIA免疫組和nApxI免疫組,但rApxIAN免疫組血清中和試驗中測定的溶血素單位與rApxIA及天然nApxI免疫組沒有顯著差異.第二次免疫2週後,用1箇LD50的APP血清1型J101株和2型標準菌株攻擊試驗動物,rApxIAN免疫組對血清1型和2型菌株的保護率分彆為80%和100%.
ApxI외독소시저흉막폐염방선간균(APP)최중요적독력인자,위료연구기N단다태적면역원성,분별장apxIA기인적전장편마구(apxIA,3146bp)급기5'단1140bp적편단(apxIA5)극륭도원핵표체재체pET-28a,경IPTG유도후재대장간균중실현료표체,표체산물ApxIA화ApxIAN균이포함체적형식존재,Westem-blot검측증실량충표체산물균구유면역반응성.장순화적중조단백(rApxIA화rApxIAN)화제취적천연독소ApxI(nApxI)분별경복강면역BALB/c소서,우면역전、면역2주화4주후분별검측료ELISA항체화독소중화항체수평,결과표명,rApxIAN면역조적ELISA항체현저저우rApxIA면역조화nApxI면역조,단rApxIAN면역조혈청중화시험중측정적용혈소단위여rApxIA급천연nApxI면역조몰유현저차이.제이차면역2주후,용1개LD50적APP혈청1형J101주화2형표준균주공격시험동물,rApxIAN면역조대혈청1형화2형균주적보호솔분별위80%화100%.
