华支睾吸虫Rho GTPase样基因的识别、克隆表达与免疫鉴定
화지고흡충Rho GTPase양기인적식별、극륭표체여면역감정
Cloning and prokaryotic expression of Rho GTPase-like gene of Clonorchis sinensis
  • 万方数据
    中国人兽共患病学报 중국인수공환병학보
    CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
    2006年 6期 561-564,593 ,共5页

    谢红艳%胡旭初%徐劲%吕刚%陈守义%魏全德%李艳文%吴忠道%余新炳

    사홍염%호욱초%서경%려강%진수의%위전덕%리염문%오충도%여신병

    华支睾吸虫%Rho GTPase%基因克隆%原核表达 華支睪吸蟲%Rho GTPase%基因剋隆%原覈錶達
    화지고흡충%Rho GTPase%기인극륭%원핵표체
    目的对新发现的华支睾吸虫( Clonorchis sinensis )的Rho GTPase样基因进行克隆、表达和免疫学鉴定.方法将用生物信息学方法识别的华支睾吸虫cDNA质粒文库中的Rho GTPase样基因的完整编码序列(CDS)克隆到原核表达质粒pET-30 a(+)中,在大肠埃希菌BL21中用IPTG诱导表达.表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blotting)进行分析,并用镍离子金属螯合亲和层析柱进行纯化.结果华支睾吸虫的Rho GTPase样基因的完整阅读框含576个碱基,编码192个氨基酸,理论分子量为21.7kDa. PCR、双酶切及DNA测序的结果均表明重组质粒pET-30a(+)-Rho GTPase构建成功.SDS-PAGE结果表明Rho GTPase基因在大肠埃希菌BL21中获得了高效表达, 重组蛋白可被感染华支睾吸虫的猫血清识别, 表明其具有免疫反应性.亲和层析获得了高纯度的蛋白.结论华支睾吸虫的Rho GTPase样基因可在原核系统中获得有免疫学活性的高效表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.
    목적대신발현적화지고흡충( Clonorchis sinensis )적Rho GTPase양기인진행극륭、표체화면역학감정.방법장용생물신식학방법식별적화지고흡충cDNA질립문고중적Rho GTPase양기인적완정편마서렬(CDS)극륭도원핵표체질립pET-30 a(+)중,재대장애희균BL21중용IPTG유도표체.표체산물통과십이완기광산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)화단백인적(Western blotting)진행분석,병용얼리자금속오합친화층석주진행순화.결과화지고흡충적Rho GTPase양기인적완정열독광함576개감기,편마192개안기산,이론분자량위21.7kDa. PCR、쌍매절급DNA측서적결과균표명중조질립pET-30a(+)-Rho GTPase구건성공.SDS-PAGE결과표명Rho GTPase기인재대장애희균BL21중획득료고효표체, 중조단백가피감염화지고흡충적묘혈청식별, 표명기구유면역반응성.친화층석획득료고순도적단백.결론화지고흡충적Rho GTPase양기인가재원핵계통중획득유면역학활성적고효표체,위진일보연구해단백적공능전정료기출.
    원문보기 원문다운로드 사이트로이동
저자의 최근 논문