华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2007年
1期
130-133
,共4页
余贻汉%杨道锋%谢林卡%朱慧芬%沈关心
餘貽漢%楊道鋒%謝林卡%硃慧芬%瀋關心
여이한%양도봉%사림잡%주혜분%침관심
人转化生长因子β%受体%转染%重组
人轉化生長因子β%受體%轉染%重組
인전화생장인자β%수체%전염%중조
目的 构建无细胞内段基因的人转化生长因子βⅡ型受体 (ΔTβRⅡ)的真核表达载体pEGFP/ΔTβRⅡ, 转染L02细胞以表达融合蛋白EGFP/ΔTβRⅡ, 并检测其生物学活性.方法 以质粒H2-3FF为模板, 用PCR方法扩增得到人转化生长因子βⅡ型受体(TβRⅡ)胞外段和跨膜段的cDNA, 将该cDNA克隆到真核表达载体pEGFP-N2上, 构建成pEGFP/ΔTβRⅡ重组质粒.经双酶切和核酸测序鉴定, 将该重组质粒转染L02细胞, 用倒置荧光显微镜观察融合蛋白EGFP的表达, 并检测其生物学活性.结果 L02 细胞转染pEGFP/ΔTβRⅡ重组质粒后, 在荧光显微镜下可以观察到融合蛋白EGFP的表达, 所表达的蛋白能显著减轻TGF-β1对L02细胞G1～S期的阻滞作用.结论 成功构建了pEGFP/ΔTβRⅡ重组质粒, 并表达了有活性的融合蛋白EGFP/ΔTβRⅡ,为进一步探讨其生物学效应奠定了基础.
目的 構建無細胞內段基因的人轉化生長因子βⅡ型受體 (ΔTβRⅡ)的真覈錶達載體pEGFP/ΔTβRⅡ, 轉染L02細胞以錶達融閤蛋白EGFP/ΔTβRⅡ, 併檢測其生物學活性.方法 以質粒H2-3FF為模闆, 用PCR方法擴增得到人轉化生長因子βⅡ型受體(TβRⅡ)胞外段和跨膜段的cDNA, 將該cDNA剋隆到真覈錶達載體pEGFP-N2上, 構建成pEGFP/ΔTβRⅡ重組質粒.經雙酶切和覈痠測序鑒定, 將該重組質粒轉染L02細胞, 用倒置熒光顯微鏡觀察融閤蛋白EGFP的錶達, 併檢測其生物學活性.結果 L02 細胞轉染pEGFP/ΔTβRⅡ重組質粒後, 在熒光顯微鏡下可以觀察到融閤蛋白EGFP的錶達, 所錶達的蛋白能顯著減輕TGF-β1對L02細胞G1～S期的阻滯作用.結論 成功構建瞭pEGFP/ΔTβRⅡ重組質粒, 併錶達瞭有活性的融閤蛋白EGFP/ΔTβRⅡ,為進一步探討其生物學效應奠定瞭基礎.
목적 구건무세포내단기인적인전화생장인자βⅡ형수체 (ΔTβRⅡ)적진핵표체재체pEGFP/ΔTβRⅡ, 전염L02세포이표체융합단백EGFP/ΔTβRⅡ, 병검측기생물학활성.방법 이질립H2-3FF위모판, 용PCR방법확증득도인전화생장인자βⅡ형수체(TβRⅡ)포외단화과막단적cDNA, 장해cDNA극륭도진핵표체재체pEGFP-N2상, 구건성pEGFP/ΔTβRⅡ중조질립.경쌍매절화핵산측서감정, 장해중조질립전염L02세포, 용도치형광현미경관찰융합단백EGFP적표체, 병검측기생물학활성.결과 L02 세포전염pEGFP/ΔTβRⅡ중조질립후, 재형광현미경하가이관찰도융합단백EGFP적표체, 소표체적단백능현저감경TGF-β1대L02세포G1～S기적조체작용.결론 성공구건료pEGFP/ΔTβRⅡ중조질립, 병표체료유활성적융합단백EGFP/ΔTβRⅡ,위진일보탐토기생물학효응전정료기출.
