清华大学学报(自然科学版)
清華大學學報(自然科學版)
청화대학학보(자연과학판)
Journal of Tsinghua University
2007年
12期
2176-2179
,共4页
史悦%于慧敏%罗晖%田卓玲%沈忠耀
史悅%于慧敏%囉暉%田卓玲%瀋忠耀
사열%우혜민%라휘%전탁령%침충요
腈水合酶%重组大肠杆菌%重组毕赤酵母%定点突变%比酶活
腈水閤酶%重組大腸桿菌%重組畢赤酵母%定點突變%比酶活
정수합매%중조대장간균%중조필적효모%정점돌변%비매활
为了提高腈水合酶基因的重组表达水平,提出了3种基因策略,在重组大肠杆菌中共表达激活子序列、在重组毕赤酵母中表达以及对a亚基的起始密码子进行定点突变.结果表明:对a亚基的起始密码子进行定点突变的基因策略为最佳方案,突交后的腈水合酶基因在重组E.coli XL1-Blue(pUC18-NHBAM)中表达时,腈水合酶的比酶活(以干菌质量计)提高到51U/mg.进一步以pET28a为载体,插入突变后的腈水合酶基因,构建重组菌株E.coli BL21(DE3)/pETNHM.对优选菌株进行培养条件和诱导条件的优化,腑水合酶的最高比酶活达到450U/mg.
為瞭提高腈水閤酶基因的重組錶達水平,提齣瞭3種基因策略,在重組大腸桿菌中共錶達激活子序列、在重組畢赤酵母中錶達以及對a亞基的起始密碼子進行定點突變.結果錶明:對a亞基的起始密碼子進行定點突變的基因策略為最佳方案,突交後的腈水閤酶基因在重組E.coli XL1-Blue(pUC18-NHBAM)中錶達時,腈水閤酶的比酶活(以榦菌質量計)提高到51U/mg.進一步以pET28a為載體,插入突變後的腈水閤酶基因,構建重組菌株E.coli BL21(DE3)/pETNHM.對優選菌株進行培養條件和誘導條件的優化,腑水閤酶的最高比酶活達到450U/mg.
위료제고정수합매기인적중조표체수평,제출료3충기인책략,재중조대장간균중공표체격활자서렬、재중조필적효모중표체이급대a아기적기시밀마자진행정점돌변.결과표명:대a아기적기시밀마자진행정점돌변적기인책략위최가방안,돌교후적정수합매기인재중조E.coli XL1-Blue(pUC18-NHBAM)중표체시,정수합매적비매활(이간균질량계)제고도51U/mg.진일보이pET28a위재체,삽입돌변후적정수합매기인,구건중조균주E.coli BL21(DE3)/pETNHM.대우선균주진행배양조건화유도조건적우화,부수합매적최고비매활체도450U/mg.
