江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2009年
2期
291-295
,共5页
夏兴霞%刘洁%王永山%诸玉梅%欧阳伟%何孔旺%张雪寒
夏興霞%劉潔%王永山%諸玉梅%歐暘偉%何孔旺%張雪寒
하흥하%류길%왕영산%제옥매%구양위%하공왕%장설한
肠出血性大肠杆菌O157:H7%单克隆抗体(mAb)%生物制剂%人兽共患病
腸齣血性大腸桿菌O157:H7%單剋隆抗體(mAb)%生物製劑%人獸共患病
장출혈성대장간균O157:H7%단극륭항체(mAb)%생물제제%인수공환병
将E.coli O157:H7(EHEC-O157:H7)用甲醛灭活、超声破碎,免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞;与SP2/0骨髓瘤细胞融合后,获得7株分泌抗E.coli O157:H7单克隆抗体(mAbs)的杂交瘤细胞株,分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2aκ、IgG2aκ、IgG1κ、IgMκ、IgMλ、IgMκ和IgG2aκ.用间接ELISA检测,E7和F1细胞培养上清液的效价为1.6×103,腹水效价均为1×1011;C3、F5、B8、G9和G11细胞培养上清液的效价为1×10～2×102,腹水效价均为1×103.相加ELISA结果显示,F1、G9和G11 3株mAbs对应相同的抗原表位,而其它4株对应不同的抗原表位.用间接ELISA分析特异性,7株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应.Western blotting表明,C3、E7和F1 3株mAbs在蛋白分子量28×103处有特异性条带,而其它4株mAbs则未显示蛋白带.
將E.coli O157:H7(EHEC-O157:H7)用甲醛滅活、超聲破碎,免疫BALB/c小鼠,製備免疫脾細胞;與SP2/0骨髓瘤細胞融閤後,穫得7株分泌抗E.coli O157:H7單剋隆抗體(mAbs)的雜交瘤細胞株,分彆命名為F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3,Ig亞類分彆是IgG2aκ、IgG2aκ、IgG1κ、IgMκ、IgMλ、IgMκ和IgG2aκ.用間接ELISA檢測,E7和F1細胞培養上清液的效價為1.6×103,腹水效價均為1×1011;C3、F5、B8、G9和G11細胞培養上清液的效價為1×10～2×102,腹水效價均為1×103.相加ELISA結果顯示,F1、G9和G11 3株mAbs對應相同的抗原錶位,而其它4株對應不同的抗原錶位.用間接ELISA分析特異性,7株mAbs與某些其他血清型的大腸桿菌有交扠反應.Western blotting錶明,C3、E7和F1 3株mAbs在蛋白分子量28×103處有特異性條帶,而其它4株mAbs則未顯示蛋白帶.
장E.coli O157:H7(EHEC-O157:H7)용갑철멸활、초성파쇄,면역BALB/c소서,제비면역비세포;여SP2/0골수류세포융합후,획득7주분비항E.coli O157:H7단극륭항체(mAbs)적잡교류세포주,분별명명위F5、B8、E7、G9、G11、F1화C3,Ig아류분별시IgG2aκ、IgG2aκ、IgG1κ、IgMκ、IgMλ、IgMκ화IgG2aκ.용간접ELISA검측,E7화F1세포배양상청액적효개위1.6×103,복수효개균위1×1011;C3、F5、B8、G9화G11세포배양상청액적효개위1×10～2×102,복수효개균위1×103.상가ELISA결과현시,F1、G9화G11 3주mAbs대응상동적항원표위,이기타4주대응불동적항원표위.용간접ELISA분석특이성,7주mAbs여모사기타혈청형적대장간균유교차반응.Western blotting표명,C3、E7화F1 3주mAbs재단백분자량28×103처유특이성조대,이기타4주mAbs칙미현시단백대.
