中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2010年
12期
1005-1008
,共4页
王芹%李进%赵欣然%宋力%刘强%岳井银%樊飞跃
王芹%李進%趙訢然%宋力%劉彊%嶽井銀%樊飛躍
왕근%리진%조흔연%송력%류강%악정은%번비약
IL-21基因%绿色荧光蛋白%腺病毒%基因治疗
IL-21基因%綠色熒光蛋白%腺病毒%基因治療
IL-21기인%록색형광단백%선병독%기인치료
目的 制备表达绿色荧光蛋白的含人白细胞介素21(IL-21)基因的重组复制缺陷型腺病毒,为IL-21基因治疗肿瘤的研究奠定基础.方法 从人外周血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增IL-21基因片段,PCR产物和pDC316-mCMV-EGFP载体分别经限制性内切酶Notl与HindⅢ双酶切,然后将酶切产物连接、转化,构建pDC316-IL21-EGFP重组质粒.重组质粒经酶切和测序鉴定后,与腺病毒骨架质粒pBHGlox_E1,3CreF35共转染293细胞,包装产生Ad5F35-IL21-EGFP重组腺病毒,并测定病毒滴度.观察Ad5F35-IL21-EGFP腺病毒转染后食管癌细胞EC-9706的生长曲线和细胞周期的变化.结果 pDC316-IL21-EGFP重组质粒经酶切和测序证实,IL-21基因片段正确插入pDC316-mCMV-EGFP栽体中且与GenBank中,IL-21基因序列一致.AdSF35-IL21-EGFP重组腺病毒栽体在293细胞中包装成功.获得成熟的病毒颗粒,经鉴定有IL-21基因和绿色荧光蛋白的表达.测得Ad5F35-IL-21-EGFP病毒颗粒滴度为9×1011VP/ml,感染性滴度为5×1010IU/ml.AdSF35-IL21-EGFP转染后,EC-9706细胞的生长缓慢(P＜0.05),G1期细胞增加,而G2期和S期细胞减少.结论 成功制备了表达绿色荧光蛋白的人IL-21基因的重组腺病毒,且病毒滴度较高.腺病毒介导的外源性IL-21基因可有效转染EC-9706细胞,并对其生长有抑制作用.
目的 製備錶達綠色熒光蛋白的含人白細胞介素21(IL-21)基因的重組複製缺陷型腺病毒,為IL-21基因治療腫瘤的研究奠定基礎.方法 從人外週血淋巴細胞提取總RNA,經RT-PCR擴增IL-21基因片段,PCR產物和pDC316-mCMV-EGFP載體分彆經限製性內切酶Notl與HindⅢ雙酶切,然後將酶切產物連接、轉化,構建pDC316-IL21-EGFP重組質粒.重組質粒經酶切和測序鑒定後,與腺病毒骨架質粒pBHGlox_E1,3CreF35共轉染293細胞,包裝產生Ad5F35-IL21-EGFP重組腺病毒,併測定病毒滴度.觀察Ad5F35-IL21-EGFP腺病毒轉染後食管癌細胞EC-9706的生長麯線和細胞週期的變化.結果 pDC316-IL21-EGFP重組質粒經酶切和測序證實,IL-21基因片段正確插入pDC316-mCMV-EGFP栽體中且與GenBank中,IL-21基因序列一緻.AdSF35-IL21-EGFP重組腺病毒栽體在293細胞中包裝成功.穫得成熟的病毒顆粒,經鑒定有IL-21基因和綠色熒光蛋白的錶達.測得Ad5F35-IL-21-EGFP病毒顆粒滴度為9×1011VP/ml,感染性滴度為5×1010IU/ml.AdSF35-IL21-EGFP轉染後,EC-9706細胞的生長緩慢(P＜0.05),G1期細胞增加,而G2期和S期細胞減少.結論 成功製備瞭錶達綠色熒光蛋白的人IL-21基因的重組腺病毒,且病毒滴度較高.腺病毒介導的外源性IL-21基因可有效轉染EC-9706細胞,併對其生長有抑製作用.
목적 제비표체록색형광단백적함인백세포개소21(IL-21)기인적중조복제결함형선병독,위IL-21기인치료종류적연구전정기출.방법 종인외주혈림파세포제취총RNA,경RT-PCR확증IL-21기인편단,PCR산물화pDC316-mCMV-EGFP재체분별경한제성내절매Notl여HindⅢ쌍매절,연후장매절산물련접、전화,구건pDC316-IL21-EGFP중조질립.중조질립경매절화측서감정후,여선병독골가질립pBHGlox_E1,3CreF35공전염293세포,포장산생Ad5F35-IL21-EGFP중조선병독,병측정병독적도.관찰Ad5F35-IL21-EGFP선병독전염후식관암세포EC-9706적생장곡선화세포주기적변화.결과 pDC316-IL21-EGFP중조질립경매절화측서증실,IL-21기인편단정학삽입pDC316-mCMV-EGFP재체중차여GenBank중,IL-21기인서렬일치.AdSF35-IL21-EGFP중조선병독재체재293세포중포장성공.획득성숙적병독과립,경감정유IL-21기인화록색형광단백적표체.측득Ad5F35-IL-21-EGFP병독과립적도위9×1011VP/ml,감염성적도위5×1010IU/ml.AdSF35-IL21-EGFP전염후,EC-9706세포적생장완만(P＜0.05),G1기세포증가,이G2기화S기세포감소.결론 성공제비료표체록색형광단백적인IL-21기인적중조선병독,차병독적도교고.선병독개도적외원성IL-21기인가유효전염EC-9706세포,병대기생장유억제작용.
