江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2011年
5期
24-26
,共3页
王强%金则新%祁彩虹%李钧敏%彭礼琼
王彊%金則新%祁綵虹%李鈞敏%彭禮瓊
왕강%금칙신%기채홍%리균민%팽례경
牛膝%ISSR%优化%遗传多样性
牛膝%ISSR%優化%遺傳多樣性
우슬%ISSR%우화%유전다양성
采用改进的SDS法提取牛膝(Achyranthes bidentata)基因组DNA,利用单因素试验对ISSR反应体系中的Mg2+浓度、dNTP浓度、模板DNA用量、Taq DNA聚合酶用量、BSA浓度、引物用量进行筛选和优化,得出了适用于牛膝ISSR分析的扩增条件:10 μL PCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液(200 mmol/L Tris·HC1,pH值8.8,100 mmol/LKCl,1％ TritonX - 100,100 mmol/L( NH4) 2SO4,15 mmol/L MgCl2),1.5 UTaq DNA聚合酶,2 mg/mL BSA,15 ng模板DNA,10 pmol引物,0.5 mmol/L dNTP,2.0 mmol/L Mg2.利用优化反应体系从100个ISSR引物中筛选出12个重复性好、稳定性高的引物对24个牛膝个体的DNA进行扩增,共得到85个位点,其中74个为多态位点,多态位点百分率为87.06％,Nei指数为0.330 3,Shannon信息指数为0.490 5,表明牛膝的遗传多样性处于较高水平.
採用改進的SDS法提取牛膝(Achyranthes bidentata)基因組DNA,利用單因素試驗對ISSR反應體繫中的Mg2+濃度、dNTP濃度、模闆DNA用量、Taq DNA聚閤酶用量、BSA濃度、引物用量進行篩選和優化,得齣瞭適用于牛膝ISSR分析的擴增條件:10 μL PCR反應體積,1×Taq酶配套緩遲液(200 mmol/L Tris·HC1,pH值8.8,100 mmol/LKCl,1％ TritonX - 100,100 mmol/L( NH4) 2SO4,15 mmol/L MgCl2),1.5 UTaq DNA聚閤酶,2 mg/mL BSA,15 ng模闆DNA,10 pmol引物,0.5 mmol/L dNTP,2.0 mmol/L Mg2.利用優化反應體繫從100箇ISSR引物中篩選齣12箇重複性好、穩定性高的引物對24箇牛膝箇體的DNA進行擴增,共得到85箇位點,其中74箇為多態位點,多態位點百分率為87.06％,Nei指數為0.330 3,Shannon信息指數為0.490 5,錶明牛膝的遺傳多樣性處于較高水平.
채용개진적SDS법제취우슬(Achyranthes bidentata)기인조DNA,이용단인소시험대ISSR반응체계중적Mg2+농도、dNTP농도、모판DNA용량、Taq DNA취합매용량、BSA농도、인물용량진행사선화우화,득출료괄용우우슬ISSR분석적확증조건:10 μL PCR반응체적,1×Taq매배투완충액(200 mmol/L Tris·HC1,pH치8.8,100 mmol/LKCl,1％ TritonX - 100,100 mmol/L( NH4) 2SO4,15 mmol/L MgCl2),1.5 UTaq DNA취합매,2 mg/mL BSA,15 ng모판DNA,10 pmol인물,0.5 mmol/L dNTP,2.0 mmol/L Mg2.이용우화반응체계종100개ISSR인물중사선출12개중복성호、은정성고적인물대24개우슬개체적DNA진행확증,공득도85개위점,기중74개위다태위점,다태위점백분솔위87.06％,Nei지수위0.330 3,Shannon신식지수위0.490 5,표명우슬적유전다양성처우교고수평.
