生命科学研究
生命科學研究
생명과학연구
LIFE SCIENCE RESEARCH
2012年
3期
223-227
,共5页
邹明祥%武文君%李军%邬国军%张宁洁%刘文恩%范学工
鄒明祥%武文君%李軍%鄔國軍%張寧潔%劉文恩%範學工
추명상%무문군%리군%오국군%장저길%류문은%범학공
金黄色葡萄球菌%femB基因%基因克隆%融合蛋白
金黃色葡萄毬菌%femB基因%基因剋隆%融閤蛋白
금황색포도구균%femB기인%기인극륭%융합단백
金黄色葡萄球菌femB基因与甲氧西林高水平耐药密切相关,可能成为开发抗MRSA药物的新靶位,以金葡菌基因组DNA为模板.PCR扩增emB全长基因,所得片段与pGM-T载体连接并转化感受态大肠杆菌DH5α,阳性克隆以PCR、双酶切及测序鉴定.将鉴定正确的目的片段定向克隆到pGEX--4T-1表达载体中,转化至大肠杆菌BL21后经IPTG诱导表达GST/FemB融合蛋白;采用SDS-PAGE及Western blot对融合蛋白进行鉴定.结果显示,重组质粒在宿主菌中获得了高效表达,融合蛋白相对分子质量为75 kD,该融合蛋白可与抗GST-tag抗体特异结合;表明femB基因的原核表迭系统构建成功,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.
金黃色葡萄毬菌femB基因與甲氧西林高水平耐藥密切相關,可能成為開髮抗MRSA藥物的新靶位,以金葡菌基因組DNA為模闆.PCR擴增emB全長基因,所得片段與pGM-T載體連接併轉化感受態大腸桿菌DH5α,暘性剋隆以PCR、雙酶切及測序鑒定.將鑒定正確的目的片段定嚮剋隆到pGEX--4T-1錶達載體中,轉化至大腸桿菌BL21後經IPTG誘導錶達GST/FemB融閤蛋白;採用SDS-PAGE及Western blot對融閤蛋白進行鑒定.結果顯示,重組質粒在宿主菌中穫得瞭高效錶達,融閤蛋白相對分子質量為75 kD,該融閤蛋白可與抗GST-tag抗體特異結閤;錶明femB基因的原覈錶迭繫統構建成功,為進一步研究其生物學功能奠定瞭基礎.
금황색포도구균femB기인여갑양서림고수평내약밀절상관,가능성위개발항MRSA약물적신파위,이금포균기인조DNA위모판.PCR확증emB전장기인,소득편단여pGM-T재체련접병전화감수태대장간균DH5α,양성극륭이PCR、쌍매절급측서감정.장감정정학적목적편단정향극륭도pGEX--4T-1표체재체중,전화지대장간균BL21후경IPTG유도표체GST/FemB융합단백;채용SDS-PAGE급Western blot대융합단백진행감정.결과현시,중조질립재숙주균중획득료고효표체,융합단백상대분자질량위75 kD,해융합단백가여항GST-tag항체특이결합;표명femB기인적원핵표질계통구건성공,위진일보연구기생물학공능전정료기출.
