微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2004年
2期
220-225
,共6页
阿拉伯糖苷酶%基因表达%重组酶纯化%酶学性质
阿拉伯糖苷酶%基因錶達%重組酶純化%酶學性質
아랍백당감매%기인표체%중조매순화%매학성질
采用PCR从海栖热袍菌(Thermotoga maritima)克隆出编码极耐热稳定性阿拉伯糖苷酶基因,以pET-20b为表达质粒,与其C末端6个组氨酸标签序列融合,在大肠杆菌中得到高效表达.基因表达产物通过热处理和亲和层析柱纯化后,酶纯度达电泳均一.纯化重组酶稳定性检测表明,阿拉伯糖苷酶活性最适作用温度和最适作用pH分别为90～95℃和pH 5.0～5.5,在pH 4.2～8.2之间酶活力稳定,95℃的半衰期为4h;SDS-PAGE测得酶的分子量为56.57 kD,与理论推算值相吻合.在所测定的底物中,阿拉伯糖苷酶仅对对硝基苯-阿拉伯呋喃糖苷(pNPAF)有专一性水解作用,其动力学参数Km值为0.18mmol/L, Vmax为139μmol/min*mg.
採用PCR從海棲熱袍菌(Thermotoga maritima)剋隆齣編碼極耐熱穩定性阿拉伯糖苷酶基因,以pET-20b為錶達質粒,與其C末耑6箇組氨痠標籤序列融閤,在大腸桿菌中得到高效錶達.基因錶達產物通過熱處理和親和層析柱純化後,酶純度達電泳均一.純化重組酶穩定性檢測錶明,阿拉伯糖苷酶活性最適作用溫度和最適作用pH分彆為90～95℃和pH 5.0～5.5,在pH 4.2～8.2之間酶活力穩定,95℃的半衰期為4h;SDS-PAGE測得酶的分子量為56.57 kD,與理論推算值相吻閤.在所測定的底物中,阿拉伯糖苷酶僅對對硝基苯-阿拉伯呋喃糖苷(pNPAF)有專一性水解作用,其動力學參數Km值為0.18mmol/L, Vmax為139μmol/min*mg.
채용PCR종해서열포균(Thermotoga maritima)극륭출편마겁내열은정성아랍백당감매기인,이pET-20b위표체질립,여기C말단6개조안산표첨서렬융합,재대장간균중득도고효표체.기인표체산물통과열처리화친화층석주순화후,매순도체전영균일.순화중조매은정성검측표명,아랍백당감매활성최괄작용온도화최괄작용pH분별위90～95℃화pH 5.0～5.5,재pH 4.2～8.2지간매활력은정,95℃적반쇠기위4h;SDS-PAGE측득매적분자량위56.57 kD,여이론추산치상문합.재소측정적저물중,아랍백당감매부대대초기분-아랍백부남당감(pNPAF)유전일성수해작용,기동역학삼수Km치위0.18mmol/L, Vmax위139μmol/min*mg.
