CAJ | 학술논문

目的:采用组织块贴壁法培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,并应用光镜、电镜和免疫组织化学方法观察细胞各生长时期的形态变化.方法:实验于2004-02/08在中国医科大学基础医学院药理实验室完成.选择健康清洁级Wistar大鼠30只,体质量150～180 g,无菌条件下取全段主动脉中膜组织修剪成1 mm×1 mm大小的组织块直接贴壁于一次性塑料培养皿中,组织块间距0.5 cm,保证细胞从组织块游出后有足够的生长空间并保持局部细胞密度的均匀,发现漂起的组织块及时清理,于37℃孵箱内放置1.5 h左右使组织块与壁贴附后,缓慢加入改良Eagle培养液培养3～5 d,待有细胞从组织块周围游出后换液.当细胞长满培养皿时即可传代.采用倒置相差显微镜和透射电镜及抗α-平滑肌肌动蛋白免疫组织化学方法观察主动脉平滑肌细胞的形态.绘制主动脉平滑肌细胞生长曲线,观察各生长时期的变化,并评估其培养方法的优点.结果:30只大鼠全部进入结果分析.①技术方法优点:贴块方便,直接一次性贴壁使污染机会少,随组织块生长随时清理漂起的组织块,可减少对其他组织块的毒性作用,并增加已游离出的细胞生长空间.②原代培养血管平滑肌细胞:光镜观察形态多样,大小略有差异,胞体较小,胞质折光性强.③传代血管平滑肌细胞:光镜下观察呈现特征性"峰"、"谷"状生长.电镜下观察:细胞形态不规则,胞浆内有肌丝,纵向平行排列,有密区,具备平滑肌细胞特征.免疫组织化学染色后可见细胞浆中大量平行条状棕黄染色、胞核不着色,所有细胞均染色,呈阳性.④主动脉平滑肌细胞生长曲线:血管平滑肌细胞生长曲线近似"S"形,传代后第1天细胞数有所减少,经过2 d潜伏适应期后进入对数生长期,持续两三天进入平台期.结论:组织块贴壁法培养技术具有操作简便,污染机会少,有足够细胞生长空间的优点,经光镜和电镜观察培养出新的主动脉血管平滑肌细胞具有平滑肌细胞特征,免疫组织化学染色也显示所有细胞均呈阳性.传代培养后第2天进入对数生长期,持续两三天进入平台期,可产生纯度高及数量多的平滑肌细胞. 目的:採用組織塊貼壁法培養大鼠主動脈血管平滑肌細胞,併應用光鏡、電鏡和免疫組織化學方法觀察細胞各生長時期的形態變化.方法:實驗于2004-02/08在中國醫科大學基礎醫學院藥理實驗室完成.選擇健康清潔級Wistar大鼠30隻,體質量150～180 g,無菌條件下取全段主動脈中膜組織脩剪成1 mm×1 mm大小的組織塊直接貼壁于一次性塑料培養皿中,組織塊間距0.5 cm,保證細胞從組織塊遊齣後有足夠的生長空間併保持跼部細胞密度的均勻,髮現漂起的組織塊及時清理,于37℃孵箱內放置1.5 h左右使組織塊與壁貼附後,緩慢加入改良Eagle培養液培養3～5 d,待有細胞從組織塊週圍遊齣後換液.噹細胞長滿培養皿時即可傳代.採用倒置相差顯微鏡和透射電鏡及抗α-平滑肌肌動蛋白免疫組織化學方法觀察主動脈平滑肌細胞的形態.繪製主動脈平滑肌細胞生長麯線,觀察各生長時期的變化,併評估其培養方法的優點.結果:30隻大鼠全部進入結果分析.①技術方法優點:貼塊方便,直接一次性貼壁使汙染機會少,隨組織塊生長隨時清理漂起的組織塊,可減少對其他組織塊的毒性作用,併增加已遊離齣的細胞生長空間.②原代培養血管平滑肌細胞:光鏡觀察形態多樣,大小略有差異,胞體較小,胞質摺光性彊.③傳代血管平滑肌細胞:光鏡下觀察呈現特徵性"峰"、"穀"狀生長.電鏡下觀察:細胞形態不規則,胞漿內有肌絲,縱嚮平行排列,有密區,具備平滑肌細胞特徵.免疫組織化學染色後可見細胞漿中大量平行條狀棕黃染色、胞覈不著色,所有細胞均染色,呈暘性.④主動脈平滑肌細胞生長麯線:血管平滑肌細胞生長麯線近似"S"形,傳代後第1天細胞數有所減少,經過2 d潛伏適應期後進入對數生長期,持續兩三天進入平檯期.結論:組織塊貼壁法培養技術具有操作簡便,汙染機會少,有足夠細胞生長空間的優點,經光鏡和電鏡觀察培養齣新的主動脈血管平滑肌細胞具有平滑肌細胞特徵,免疫組織化學染色也顯示所有細胞均呈暘性.傳代培養後第2天進入對數生長期,持續兩三天進入平檯期,可產生純度高及數量多的平滑肌細胞.
목적:채용조직괴첩벽법배양대서주동맥혈관평활기세포,병응용광경、전경화면역조직화학방법관찰세포각생장시기적형태변화.방법:실험우2004-02/08재중국의과대학기출의학원약리실험실완성.선택건강청길급Wistar대서30지,체질량150～180 g,무균조건하취전단주동맥중막조직수전성1 mm×1 mm대소적조직괴직접첩벽우일차성소료배양명중,조직괴간거0.5 cm,보증세포종조직괴유출후유족구적생장공간병보지국부세포밀도적균균,발현표기적조직괴급시청리,우37℃부상내방치1.5 h좌우사조직괴여벽첩부후,완만가입개량Eagle배양액배양3～5 d,대유세포종조직괴주위유출후환액.당세포장만배양명시즉가전대.채용도치상차현미경화투사전경급항α-평활기기동단백면역조직화학방법관찰주동맥평활기세포적형태.회제주동맥평활기세포생장곡선,관찰각생장시기적변화,병평고기배양방법적우점.결과:30지대서전부진입결과분석.①기술방법우점:첩괴방편,직접일차성첩벽사오염궤회소,수조직괴생장수시청리표기적조직괴,가감소대기타조직괴적독성작용,병증가이유리출적세포생장공간.②원대배양혈관평활기세포:광경관찰형태다양,대소략유차이,포체교소,포질절광성강.③전대혈관평활기세포:광경하관찰정현특정성"봉"、"곡"상생장.전경하관찰:세포형태불규칙,포장내유기사,종향평행배렬,유밀구,구비평활기세포특정.면역조직화학염색후가견세포장중대량평행조상종황염색、포핵불착색,소유세포균염색,정양성.④주동맥평활기세포생장곡선:혈관평활기세포생장곡선근사"S"형,전대후제1천세포수유소감소,경과2 d잠복괄응기후진입대수생장기,지속량삼천진입평태기.결론:조직괴첩벽법배양기술구유조작간편,오염궤회소,유족구세포생장공간적우점,경광경화전경관찰배양출신적주동맥혈관평활기세포구유평활기세포특정,면역조직화학염색야현시소유세포균정양성.전대배양후제2천진입대수생장기,지속량삼천진입평태기,가산생순도고급수량다적평활기세포.