微循环学杂志
微循環學雜誌
미순배학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROCIRCULATION
2006年
2期
51-52,55
,共3页
白细胞介素12干扰RNA%腺病毒载体%克隆%T4连接酶%树突状细胞
白細胞介素12榦擾RNA%腺病毒載體%剋隆%T4連接酶%樹突狀細胞
백세포개소12간우RNA%선병독재체%극륭%T4련접매%수돌상세포
目的:构建载有白细胞介素-12干扰RNA(IL-12 siRNA)基因的,能在树突状细胞(DC)表达的重组腺病毒载体,为免疫耐受提供基础.方法:将IL-12p35 siRNA和IL-12p40 siRNAcDNA克隆于腺病毒穿梭质粒pShuttle2,得到重组质粒,并与腺病毒骨架质粒BD Adeno-XTM体外连接后代共转化大肠杆菌DH5α菌株, 重组腺病毒质粒经过293细胞的包装扩增及氯化铯(CsCl)纯化,生成带有IL-12p35和IL-12p40 siRNA基因的重组腺病毒载体,感染DC细胞.结果:经形态学、病毒DNA酶切、聚合酶链反应(PCR)和逆转录(RT)等方法的鉴定,证实了载体构建的正确性;经测定,病毒滴度为2.5×1010efu/ml.结论:成功构建带有IL-12p35 siRNA 和IL-12p40 siRNA cDNA的重组腺病毒载体,其所携带的载体能够转染小鼠DC并干扰其在DC中表达,为进一步的研究奠定了基础.
目的:構建載有白細胞介素-12榦擾RNA(IL-12 siRNA)基因的,能在樹突狀細胞(DC)錶達的重組腺病毒載體,為免疫耐受提供基礎.方法:將IL-12p35 siRNA和IL-12p40 siRNAcDNA剋隆于腺病毒穿梭質粒pShuttle2,得到重組質粒,併與腺病毒骨架質粒BD Adeno-XTM體外連接後代共轉化大腸桿菌DH5α菌株, 重組腺病毒質粒經過293細胞的包裝擴增及氯化銫(CsCl)純化,生成帶有IL-12p35和IL-12p40 siRNA基因的重組腺病毒載體,感染DC細胞.結果:經形態學、病毒DNA酶切、聚閤酶鏈反應(PCR)和逆轉錄(RT)等方法的鑒定,證實瞭載體構建的正確性;經測定,病毒滴度為2.5×1010efu/ml.結論:成功構建帶有IL-12p35 siRNA 和IL-12p40 siRNA cDNA的重組腺病毒載體,其所攜帶的載體能夠轉染小鼠DC併榦擾其在DC中錶達,為進一步的研究奠定瞭基礎.
목적:구건재유백세포개소-12간우RNA(IL-12 siRNA)기인적,능재수돌상세포(DC)표체적중조선병독재체,위면역내수제공기출.방법:장IL-12p35 siRNA화IL-12p40 siRNAcDNA극륭우선병독천사질립pShuttle2,득도중조질립,병여선병독골가질립BD Adeno-XTM체외련접후대공전화대장간균DH5α균주, 중조선병독질립경과293세포적포장확증급록화색(CsCl)순화,생성대유IL-12p35화IL-12p40 siRNA기인적중조선병독재체,감염DC세포.결과:경형태학、병독DNA매절、취합매련반응(PCR)화역전록(RT)등방법적감정,증실료재체구건적정학성;경측정,병독적도위2.5×1010efu/ml.결론:성공구건대유IL-12p35 siRNA 화IL-12p40 siRNA cDNA적중조선병독재체,기소휴대적재체능구전염소서DC병간우기재DC중표체,위진일보적연구전정료기출.
